血液病的panel搭配

wmj123456

倪老师，你好，想了解下临床中用流式诊断白血病，骨髓瘤及白血病微小残留等的大致流程？是先做初筛，然后加做几种方案进行确诊吗？针对每一种疾病，每次做的panel是固定的吗？还是根据实际情况进行调整，加做的方案会进行相应的调整？


看了一些资料，一些技术服务的公司是给的固定的panel的方案，也有一些书籍讲到哪些marker在某群细胞中表达的比例高低，以及表达的特异性，也有一些方案。但是不太理解这些方案是不是可以直接套用。希望得到倪老师的帮助。

wmj123456

还有一个问题，如果我们的仪器现在做9色，13色的免疫细胞亚群的方案，结果还行，补偿没有那么难调节，如果做白血病的在其他仪器上验证过的10色左右的方案，补偿是不是也可以调的可以？之前接触白血病的比较少，不太清楚它跟普通的淋巴细胞亚群检测的差异有多大。非常希望有经验的老师可以帮忙回答下问题。

niwanmao

1、公司的Panel可参考，大多是为了他们自有的抗体而设计的。
2、书籍上的方案，看编辑者，一般也建议通过原理上去看看是否可参考。

每个人会有自己的思维习惯，但大体上不会相差太大。

白血病方案，比淋巴亚群复杂，会涉及到一些抗体的荧光素搭配优化（有些荧光素搭配在一起有很大的Spreading Erro，需要避免）、抗体的克隆号问题（有些抗体染色效果不好）。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-28 08:48
1、公司的Panel可参考，大多是为了他们自有的抗体而设计的。
2、书籍上的方案，看编辑者，一般也建议通过原 ...

谢谢倪老师的回复。我是理解是，如果一个血液病的10色方案在其他仪器如BD上面是已经比较成熟了，然后再搬到其他的仪器上面做，理论上也是可以做出来的了？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-28 22:43
谢谢倪老师的回复。我是理解是，如果一个血液病的10色方案在其他仪器如BD上面是已经比较成熟了，然后再搬 ...

可以。但是分群性能，还是跟仪器会有关系。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-29 14:06
可以。但是分群性能，还是跟仪器会有关系。

倪老师，关于血液病的方案，最近在初步学习，简单总结了下，还有一些暂时不太理解的内容，能帮忙解答下吗？如下图，是用CD45和ssc设门的流式图，我们主要是看blast细胞的，先进行初筛，看是ALL-T，ALL-B，还是AML。通常是胞内染色CD3，CD79a和MPO，对应前面的3类分型。然后再加一些非系列特异性的指标如CD34，HLA-DR。
有几个问题：
1cCD3,cCD79a，cMPO这3个指标都是胞内染色的吧？是根据它们在细胞上的表达位置（CD3和CD79a算是膜蛋白吧），还是由于是做血液病，为了检测胞质内的表达，所以才胞内染色的？通常这3个指标的阳性比例大于多少，就可以初步确实是哪种系别？
2 加非系统特异性指标CD34和HLA-DR的目的是什么？
3cCD79a是初筛的，在ALL-B中表达比例高，您有见过CD79a和CD3共表达的情况吗？
4通过看CD3-CD19+和CD79a都可以来判断白血病细胞上B细胞的表达吧？

5正常病人的骨髓中，blast细胞的比例的范围有吗？

wmj123456

wmj123456 发表于 2023-7-11 22:20
倪老师，关于血液病的方案，最近在初步学习，简单总结了下，还有一些暂时不太理解的内容，能帮忙解答下吗 ...

倪老师，这个问题是问的太基础了嘛？您有时间方便回答下吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-7-11 22:20
倪老师，关于血液病的方案，最近在初步学习，简单总结了下，还有一些暂时不太理解的内容，能帮忙解答下吗 ...

不好意思，之前没关注到这些问题。
1、cCD3,cCD79a，cMPO都是胞内，CD3是跨膜分子，表面和胞内均有结合位点，但在白血病时，有些患者CD3分子开始出现了，但未表达到胞膜，故需进行破膜染色。其它两个分子结合位点均为胞内。  阳性标准目前WHO是定义为10％。  决定系列是一个逻辑性的问题，WHO对于混合白血病系列有个标准，你可用WHO为关键词搜索一下站内帖。

2、34和HLA-DR是最常见的判断原始细胞的标志之二，此外，HLA-DR还具有判断T细胞活化、判断B细胞等作用。

3、我暂时未见到cCD79a和cCD3共表达的情况，可见到两者弱表达，此时是无系列指向性的。

4、判断系列，同第1点，对抗原表达强度有要求，可见WHO相关帖。

5、正常人骨髓中那些严格来说，不叫blast，建议叫髓系祖细胞、B系祖细胞等名词更好。髓系祖细胞一般在2％以下。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-7-17 07:26
不好意思，之前没关注到这些问题。
1、cCD3,cCD79a，cMPO都是胞内，CD3是跨膜分子，表面和胞内均有结合位 ...

倪老师，我想请教下，做血液病免疫分型时，在CD45和SSC分析的时候，通常是看淋巴，单核，粒，原始细胞和有核红，有时候不太知道如何区分粒细胞和原始细胞，这块能否给些经验？第二个panel里染了CD15，可以通过这个指标来确定粒细胞的位置吗？譬如下面的图，横坐标是SSC，纵坐标是CD45。第二张图最右上角也有一群细胞，这群细胞通常是什么细胞？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-8-1 11:39
倪老师，我想请教下，做血液病免疫分型时，在CD45和SSC分析的时候，通常是看淋巴，单核，粒，原始细胞和 ...

中性粒细胞和原始细胞没分开，可能还是你的染色问题，裂解液影响了中性粒细胞的SSC。

大多数情况下中性粒和原始分得比较好，在部分分化的AML或早幼粒时，会发生重叠，但117、33、13、16等标记均能使他们分开。

第二幅图那些细胞是非特异性的。