关于BD Brilliant Stain Buffer能够降低BV及BUV系列染料非特异结合的疑问

王嘉钰

BD在BV及BUV系列染料的Data Sheet中提到，在使用两种及以上此系列染料时，使用 Brilliant Stain Buffer相比常规只含BSA或FBS的FACS Buffer能够更好地抑制BV或BUV系列染料之间的非特异结合（图1）；通过查阅Brilliant Stain Buffer和BV系列染料的说明，得知BV系列染料间的非特异结合是聚合物染料（polymer）的性质及其偶联方法导致的，而Brilliant Stain Buffer中的添加物抑制了这一过程。

我的疑问如下：
1.Brilliant Stain Buffer抑制BV系列染料之间的非特异结合的原理（添加物）是什么？我们是否可以自行向FACS Buffer中添加某些成分达到近似的结果？
2.CyTOF大部分金属抗体的标记也是先将金属络合至Polymer上，再将其偶联至抗体表面，是否说明使用富鲁达公司提供的Maxpar Cell Staining Buffer能够达到一样的效果？
3.BD给出的Protocol中，抗体终浓度通常较高（图2）。若使用经滴定后确定的较低染色浓度，是否还会出现图1中如此明显的信号溢漏？
Brilliant Stain Buffer的Data sheet等相关文件位于附件中，请各位过目。

niwanmao

1和2 ，原理不清楚，但应该会不同。
3、即使用高浓度，实际上也是可用的，这里面的染料粘连其实不明显，补偿调节到位即可。

Fusca

1. 根据BD的一些讲座和培训中的内容，BV系列染料使用了BD专利的sirgen荧光素，当多种 BV/BUV/BB染料同时使用时，经常会观察到一些像你展示的图那样的假阳性信号。这种情况多发生在多色染色中，而在2个及以下该系列染料共同使用时并不会出现这种现象。这与染料本质为由有机多聚物构成有关。这种异常信号与抗体结构中含聚乙二醇（PEG）有关。许多样本，特别是人的血液样本中经常会含有的抗PEG的抗体，Brilliant Stain Buffer 在抗体添加之前加到样品中，可以减轻这些因供体中存在抗PEG抗体原因所造成的虚影，提高染色质量。

2. 大部分的staining buffer主要目的是减少非特异性结合和增加抗原稳定性，和BV stain buffer的原理并不相同。你提到的富鲁达公司提供的Maxpar Cell Staining Buffer成分没有完全公开，但是根据其safety sheet声明是加了叠氮化钠，从而维持细胞表面抗原的稳定性。一般的stain buffer不会包含抗PEG抗体相关的组分，因此在厂家没有声明的情况下不推荐使用。

3.个人做实验的感觉，这个现象和抗体浓度虽然有一定关系，但是还是更看样本种类、样本制备过程和用了多少种BV/BUV/BB染料。一般做光谱实验和人类样本的时候如果超过三个该系列染料我们是推荐加入的，不然可能有些样本里就会有这种信号溢出，而且很难说明来源。