只有四个荧光通道panel设计

快乐小徐

新手，想请教大神们。
实验室机器是BD accuri C6 plus，除了FSC，SSC只有四色。
导师想让我同时看小鼠的单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞。本来打算染CD11b，Ly6c,Ly6G,F4/80。
可是做出来的巨噬细胞的数据和之前师姐她们的差异较大，师姐她们都是只看一两种细胞/亚群。
查文献说F480不要和Ly6G(或Gr-1）一块染，可能有共同表位。

有没有大神可以用4荧光区分这3种细胞？（不用再把这些区分出不同亚群）

niwanmao

快乐小徐 发表于 2023-6-1 10:56
感谢大神。我是从A novel Ly6C/Ly6G-based strategy to analyze the mouse splenic myeloid compartment ...

避开这两个克隆号即可。

niwanmao

4种可以一起用的，见 Analysis of Myeloid Cells in Mouse Tissues with Flow Cytometry

快乐小徐

niwanmao 发表于 2023-5-31 16:55
4种可以一起用的，见 Analysis of Myeloid Cells in Mouse Tissues with Flow Cytometry

感谢大神。我是从A novel Ly6C/Ly6G-based strategy to analyze the mouse splenic myeloid compartment看见有学者表示F480与Gr-1（或Ly6G）染色效果差的。不过确实看见有其他文献F480与Ly6G共用的

大品咿呀哟

我们用两种不同的克隆号去做，Gr-1阴性CD11b与F4/80双阳定义 并且Gr-1(RB68C5)和Ly6G(1A8)完全不干扰

lukequ

niwanmao 发表于 2023-5-31 16:55
4种可以一起用的，见 Analysis of Myeloid Cells in Mouse Tissues with Flow Cytometry

老师，我是新手，请问如何看哪些通道是相邻的荧光通道，比如FITC与PE是不是相邻的

niwanmao

lukequ 发表于 2023-6-28 19:09
老师，我是新手，请问如何看哪些通道是相邻的荧光通道，比如FITC与PE是不是相邻的
...

B和Y开头的参数，虽然不同激光器激发，但在波长上，相互之间多少都有影响。
其实不叫相邻，应该叫存在荧光渗漏。

R开头的三个参数，相互之间荧光渗漏比较明显。

V开头的4个参数，荧光渗漏也比较明显。

总体分成这三大组。

lukequ

niwanmao 发表于 2023-6-28 20:29
B和Y开头的参数，虽然不同激光器激发，但在波长上，相互之间多少都有影响。
其实不叫相邻，应该叫存在荧 ...

老师，再请教一下，阴性对照管我用同型对照，那空白对照管（不加任何荧光抗体）还需要做吗，我染的是Th17细胞，还有FMO对照的应用我也不明白，有没有学习资料？

niwanmao

lukequ 发表于 2023-6-28 22:16
老师，再请教一下，阴性对照管我用同型对照，那空白对照管（不加任何荧光抗体）还需要做吗，我染的是Th17 ...

Th17，如果你用的是胞内因子染色，那么建议设置：
FMO管——CD3、CD4
实验管——CD3、CD4、IL17

两管进行同样的实验操作（包括固定、破膜等），唯一不同的是FMO管不加IL17抗体。

lukequ

niwanmao 发表于 2023-6-29 07:42
Th17，如果你用的是胞内因子染色，那么建议设置：
FMO管——CD3、CD4
实验管——CD3、CD4、IL17

老师，如果是Treg细胞，也设置成FMO、实验管吗