CART制备后上样检测，FSC-SSC左下角的杂质和碎片都能被死活染料着色吗？

Veblen

请问一下各位老师：

样本中的杂质和碎片都会被死活染料着色吗？用的染料为zombie（选用的APC-Cy7通道检测）
老师告诉我FSC-SSC左下角的碎片和杂质都会被死活染料着色，出现阳性的信号；但是我染色出来是左下角的杂质和碎片只有一小部分是阳性（APC-Cy7），这是怎么回事呢（如图）？

悠游

zombie染料和细胞表面以及膜内的游离胺结合，产生荧光。
这部分没染上的碎片可能没有或者结构破坏了？

Yuck

这个是有点意思，有点奇怪，考虑如果膜结构破坏产生更多的自由基及胺基应该背景更高才对。没染上的话左下角的胞内没有胺基？还是说处理的时候直接把伯胺氧化没了？

niwanmao

Yuck 发表于 2023-6-3 10:33
这个是有点意思，有点奇怪，考虑如果膜结构破坏产生更多的自由基及胺基应该背景更高才对。没染上的话左下角 ...

应跟自由基无关。跟胺类反应。

左下角的碎片，从染色结果看，可能不一定是细胞碎片，至少是不含胺类的。

Veblen

niwanmao 发表于 2023-6-3 20:54
应跟自由基无关。跟胺类反应。

左下角的碎片，从染色结果看，可能不一定是细胞碎片，至少是不含胺类的。 ...

那如果要第一张图要圈细胞的话，是否应该把左下角也圈进去呢？

niwanmao

Veblen 发表于 2023-6-12 16:26
那如果要第一张图要圈细胞的话，是否应该把左下角也圈进去呢？

已明确是碎片了，还是排除掉吧。

Veblen

niwanmao 发表于 2023-6-12 17:03
已明确是碎片了，还是排除掉吧。

就是想知道左下角那一群，理论上来说是否会被死活染料染上色，从而表现出相应通道的阳性？

niwanmao

Veblen 发表于 2023-6-19 10:37
就是想知道左下角那一群，理论上来说是否会被死活染料染上色，从而表现出相应通道的阳性？ ...

Zombie、live/dead都是需要膜存在蛋白质成份才能结合。活细胞表面蛋白暴露较少，死细胞胞膜、胞内大量蛋白可结合，故荧光强度高。

至于碎片，我相信，蛋白质即使有也是微乎其微了，荧光弱/阴应该才是正常的。

Veblen

niwanmao 发表于 2023-6-20 09:00
Zombie、live/dead都是需要膜存在蛋白质成份才能结合。活细胞表面蛋白暴露较少，死细胞胞膜、胞内大量蛋 ...

明白，谢谢老师

多纳泰罗豪

我得也是这样，我是都圈上了，然后圈活死。