请问小鼠的制备分离小鼠的血小板？

hydwl2019

niwanmao

1、通过吸入异氟烷（2.5%医用级氧气）对小鼠进行终末麻醉。
2、用手术刀打开腹部，将肠管推向一边，暴露腹部大血管。
3、将带有含 ACD 缓冲液（150µl/ml血液）针头 (27 G) 的注射器插入肾静脉上方的腔静脉，以采集血液（图1）。对于体重为20.0 g的小鼠，以这种方式采集的血量通常为800-1,000µl。采血后，通过切断腔静脉对小鼠进行完全放血。
4、在采集过程中，应通过与 ACD 缓冲液快速混合来使血液抗凝。然后将血液转移至 15 mL 锥形底聚丙烯管中，并与清洗缓冲液（3 mL/mL血液、1 mL 100 mmol/L EGTA[pH 6.8] 和 2 mL 重悬缓冲液）混合。
重悬缓冲液配方：100 ml  7.5% NaHCO3， 133 ml 蒸馏水，300 mg小年血清白蛋白， 15 ml 改良的台氏无钙缓冲液。
5、将试管在22℃下以180×g离心10 min。使得较大的细胞成分如红细胞和白细胞形成团块。
6、采集富血小板血浆并转移至 15 mL 锥形底聚丙烯管中。弃去沉淀物。现在加入步骤 4 中提及的洗涤缓冲液和前列腺素E1(0.25µmol/L)，得到总体积10 mL。用 5 mL 移液器轻轻移取混合物3-5次。此时前列腺素对防止血小板活化至关重要。
7、将试管在1,250×g和22℃下离心10 min。
8、现在得到的沉淀主要由血小板组成。除去上清液，使用步骤 6 中的缓冲液和前列腺素再清洗两次，并按照步骤 7 离心。
9、此时在 10 mL 洗涤缓冲液（含0.25µmol/L前列腺素E1）中混悬后，可对血小板进行计数。
10、为了计数血小板，将血小板悬液 (15µl) 和未稀释的前列腺素E1(5µl，500µM) 混合。可在 Coulter 计数器中进行计数。请注意，必须根据小鼠血小板的大小调整计数器。小鼠血小板的直径约为0.5 µm，小于人血小板 (1-2 µm)。
11、此时，血小板可用于实验，记住在实验开始前，用0.25µmol/L前列腺素 E1 阻断活化非常重要。然后需要（通常通过稀释）去除，以评估血小板作用。

信源：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8376615/