气道上皮细胞亚群的流式细胞分析

niwanmao

气道上皮可抵御吸入环境挑战，包括污染物、病原体和过敏原，上皮功能障碍是主要肺部疾病（包括哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病和原发性纤毛运动障碍）发病机制的核心。近端气道上皮亚群，包括基底细胞、纤毛细胞、分泌细胞、中间细胞、刷状细胞和肺神经内分泌细胞，已通过组织学分析和 EM 根据其在组织内的解剖位置进行了形态学定义。单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 正在进一步推进我们对气道上皮异质性的理解。最近对人和鼠气道的研究证实了以前定义的主要气道上皮亚群的存在，确定了这些细胞的分子不同亚群，并发现了以前未被认识的细胞类型。

泛上皮抗体（EpCAM/泛细胞角蛋白）和有限的细胞类型特异性抗体（例如，纤毛细胞的 TUBA[乙酰化α微管蛋白]、基底细胞的 NGFR[神经生长因子受体] 和 ITGA6[整合素亚基α6] 以及杯状细胞的MUC5AC）已被用于流式细胞术。Bonser LR等人设计了一个方案，可同时分析气道上皮细胞的主要亚群，并为进一步了解气道上皮生理和病理提供新的工具。

方案
包括抗体名称、荧光素标记、用量、克隆号等信息



设门分析
虽然方案中纳入了CDHR3和CEACAM5，但是这两个抗体在最终的图形中呈现不理想，故作者设门时，将其去掉了。

去粘连体、去碎片后，通过NGFR/TUBA，分出TUBA+的纤毛细胞和NGFR+的B1细胞，接着将NGFR/TUBA双阴性进一步在ITGA6/CEACAM6散点图上分出CEACAM6+的分泌细胞和ITGA6+的B2细胞，最后，分泌细胞进一步可分出MUC5AC和TSPAN8双阳性的杯状细胞。





信源：Bonser LR, Koh KD, Johansson K, et al. Flow-Cytometric Analysis and Purification of Airway Epithelial-Cell Subsets. Am J Respir Cell Mol Biol. 2021;64(3):308-317. doi:10.1165/rcmb.2020-0149MAIF: 7.748 Q1