细胞消化收集问题

zhkduck

在使用原代PBMC里的单核诱导巨噬以后，需要收集下来检测marker，但是巨噬细胞贴壁特别牢，有的时候用胰酶消化1个小时都消化不下来，用细胞刮刀的话又担心对细胞损伤太大，请问各位有没有遇到过这种情况，有什么好的解决办法？

niwanmao

胰酶消化时间过长，也会影响细胞表面标记。

你可以试一下Accutase，比较温和一些。

zhkduck

好的倪老师，我试一下Accutase

zxt2009

我们遇到的问题一样，不过我的细胞没那么夸张，但也需要无EDTA胰酶消化接近10min，做凋亡简直难受，后面用过accutase，效果好点，但是含有EDTA，如果你的实验EDTA不影响，可以，不然就很难搞了。

zxt2009

niwanmao 发表于 2023-6-12 12:11
胰酶消化时间过长，也会影响细胞表面标记。

你可以试一下Accutase，比较温和一些。 ...

倪老师，很久不见，给您问个好。
还有个小问题想请教一下，我想用含有EDTA的胰酶消化贴壁细胞做流式凋亡检测，因为不含EDTA的胰酶消化细胞实在太慢了。
但是EDTA会影响Annexin V的结合，是否能用1Xbinding buffer多洗两次，中和细胞表面的EDTA，这样会好一些吗？谢谢。