请问死活染料是否需要调补偿

lgbu08696

Hi all, 有个问题在纠结 ，就是死活染料是否需要调补偿？
我需要分析的是活细胞，死细胞不用管，那么死活染料不会和活细胞结合，自然就不需要调补偿了对吗？
谢谢大家

悠游

我之前也做过死活的补偿，不过发现对结果没有明显的影响，后面染死活就没怎么调过

lgbu08696

悠游 发表于 2023-6-14 09:58
我之前也做过死活的补偿，不过发现对结果没有明显的影响，后面染死活就没怎么调过 ...

我认为活细胞不会被染上，所以也就没有补偿的问题。。

wmj123456

悠游 发表于 2023-6-14 09:58
我之前也做过死活的补偿，不过发现对结果没有明显的影响，后面染死活就没怎么调过 ...

前辈，正好再请教您个问题，如果仪器可以做十几色，但是实验中只有7,8色，其余的通道是最好删除吧？如果不删除的话，需要调节没有染色的通道与染色通道的补偿吗？
按道理来讲，不用调吧，因为不需要看不染色的通道。但是如果调了，就觉得这个补偿会更加完美一些了？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-6-15 23:50
前辈，正好再请教您个问题，如果仪器可以做十几色，但是实验中只有7,8色，其余的通道是最好删除吧？如果 ...

未染色通道还是建议保留着，别删，因为有时候一些非特异性染色，可以在这些空白通道得到排除。
至于补偿，漏到这些空白通道的荧光如果能调，也是对自己的一个锻炼，如果不调，不呈现出来也可以。

悠游

wmj123456 发表于 2023-6-15 23:50
前辈，正好再请教您个问题，如果仪器可以做十几色，但是实验中只有7,8色，其余的通道是最好删除吧？如果 ...

感觉其实这个倒是没什么硬性要求，不用的通道可以画出来看看有没有奇怪的数据出现，然后出结果的时候不呈现出来就行。
补偿的话，我现在更多是先做单阳管进行自动补偿，然后自己再微调一下就行。如果你想练习做补偿的话可以也可是都试试。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-6-16 07:36
未染色通道还是建议保留着，别删，因为有时候一些非特异性染色，可以在这些空白通道得到排除。
至于补偿 ...

倪老师，所以就是说，可以不删除不用的通道，也可以不调节它们的补偿，对于结果是没有什么影响的了

奋斗的ida

不用调补偿。组里做过补偿的，差距不大。建议自己试试，如果做了几次，结果差不多，那就不需要调补偿了。

zdvfsadb

可以用发射光谱类似的荧光素染单染管做死活染料的补偿，比如PE-Texas red抗体+beads代替Zombie Red染细胞，当然也可以用死、活细胞掺起来之后染死活染料做单染管，但是个人感觉其实这两个区别不大。区别大的反倒是你要做的组织的性质，组织制备单细胞悬液是否会有大量碎屑生成（例：脾脏 vs 肺），如果有大量碎屑等，需要去找最合适的死活染料浓度，不然死活细胞群可能分不开。

lukequ

niwanmao 发表于 2023-6-16 07:36
未染色通道还是建议保留着，别删，因为有时候一些非特异性染色，可以在这些空白通道得到排除。
至于补偿 ...

老师，我见你在某个帖子上说可以用同种属同类型的其他荧光标签抗体代替分群不好的抗体调补偿，这个同种属同类型是什么意思呢，Rat  IgG1, κ和Rat IgG1, λ这算是同种属同类型吗？