细胞周期电压问题

奋斗的鱼丸

想请教流式细胞周期电压调节的问题

做出来的结果看不到S期，G1期和G2/M期挨得特别近，是不是电压调太低了呢？
目前电压是1
求解答！

wxd

感觉不像是电压的问题。从样品名称上看，这一组用的是DMSO处理。用DMSO处理之后检测细胞周期这个实验我们做过，10%DMSO处理确实会导致细胞周期无法分析，原因是DMSO导致细胞死亡，细胞内容物泄露，降低DMSO浓度到5%处理之后，细胞周期就可以正常分析了。建议楼主看看正常培养的对照组是不是能够正常分析。

奋斗的鱼丸

wxd 发表于 2023-6-15 17:03
感觉不像是电压的问题。从样品名称上看，这一组用的是DMSO处理。用DMSO处理之后检测细胞周期这个实验我们做 ...

我们DMSO组就是对照组，用的千分之一的DMSO，应该是不影响细胞生长的。但是我这次细胞有点浓，培养的时候比较挤。是因为这个原因吗？之前都可以看到三个细胞分期的，这次不知道为什么就没有S期了

niwanmao

奋斗的鱼丸 发表于 2023-6-15 22:21
我们DMSO组就是对照组，用的千分之一的DMSO，应该是不影响细胞生长的。但是我这次细胞有点浓，培养的时候 ...

从FSC和SSC分群形状看，不太像正常的细胞似的，尤其是这个图形，感觉也太像正常的。

wxd

有可能是细胞状态不好，消化加上固定，以及后续的离心，导致细胞破碎造成的。

奋斗的鱼丸

wxd 发表于 2023-6-16 08:24
有可能是细胞状态不好，消化加上固定，以及后续的离心，导致细胞破碎造成的。 ...

这次消化好像是有一点过，大片脱落了

奋斗的鱼丸

niwanmao 发表于 2023-6-16 07:39
从FSC和SSC分群形状看，不太像正常的细胞似的，尤其是这个图形，感觉也太像正常的。 ...

请问您说的不正常是指细胞的生长状态不正常吗？这次确实细胞比较浓，处理那天看非常挤了，是因为这个原因所以细胞接触抑制、生长停滞所以没有明显的S期吗？

wxd

如果对照组也是和DMSO组一样的话，可能确实是消化加上固定，以及后续的离心，导致细胞破碎造成的。楼主可以看一下PI/SSC坐标系中有没有我附件中类似的分群。只通过FSC-A/H/W来去黏连，即使去两次，可能结果也是不准的。