PBMC 复苏

奋斗的ida

冻存后的PBMCs复苏过程中，总能看到细胞成团，导致复苏后的PBMC特别少。已经试过含有5mM EDTA的液体加入复苏中，但没有用。冻存使用90%FBS+10%EDTA或者1:2:7的冻存液比例，PBMC尽量是单细胞悬液进行冻存的。请教下复苏过程中，PBMCs细胞成团如何解决，谢谢！

niwanmao

这应该说明PBMC都已经死了。
还是需要从冻存的方法上下功夫，提高细胞活力。
你们冻存为什么用EDTA，而不是DMSO？DMSO才是关键。

Yuck

edta冻存的原理是什么，没注意过这种事。不都是DMSO扩大细胞膜通透性吗

悠游

你复苏之后染过死活吗？或者台盼蓝看看细胞活率，感觉可能冻存液配方有问题
冻存液通常是含有10%DMSO的，其他成分可以是完全培养基，也可以是FBS，EDTA没怎么听说过。

wanxgq

我们是90%FBS+10%DMSO冻存。
复苏加入3%-4%的DNA酶。（往复苏液里）

奋斗的ida

朋友们，不好意思，不是EDTA，是10%DMSO

奋斗的ida

niwanmao 发表于 2023-6-23 14:10
这应该说明PBMC都已经死了。
还是需要从冻存的方法上下功夫，提高细胞活力。
你们冻存为什么用EDTA，而不是 ...

谢谢倪老师的解答。我写错了，是10%DMSO。复苏后有染死活细胞的。PBMC木有全死。就是复苏过程，细胞成团，这个问题不知道怎么解决。

奋斗的ida

悠游 发表于 2023-6-25 09:08
你复苏之后染过死活吗？或者台盼蓝看看细胞活率，感觉可能冻存液配方有问题
冻存液通常是含有10%DMSO的，其 ...

谢谢解答。写错了，是10%DMSO，不是10%EDTA。复苏后染过死活，复苏率还可以。就是复苏过程中，会出现细胞团块，这点不知道怎么解决。谢谢。

奋斗的ida

wanxgq 发表于 2023-6-25 16:13
我们是90%FBS+10%DMSO冻存。
复苏加入3%-4%的DNA酶。（往复苏液里）

谢谢解答。我冻存配方也是这样子的，写错了，是10%DMSO。再次请教下，DNA酶是什么级别的，不会消化细胞吗？我是复苏过程经常出现细胞团块，这个问题不知道怎么解决。细胞成团块，就会损失一堆细胞，很浪费。谢谢。

悠游

奋斗的ida 发表于 2023-6-26 12:03
谢谢解答。写错了，是10%DMSO，不是10%EDTA。复苏后染过死活，复苏率还可以。就是复苏过程中，会出现细胞 ...

有可能是因为细胞太多了，一般一管冻存10^7个就够用了