因为有一些细胞对DAPI拒染。还有一些细胞不固定，直接染DAPI时，一部分DAPI会黏附在细胞膜表面，造成结果不准，与之类似的还有H33342。（这些现象是我们在工作中通过激光共聚焦显微镜观察DAPI以及H33342染色的细胞时发现的）。但是死细胞没有这些特性。因此，与其直接染色有可能会导致流式检测结果不准或者失败，固定后染色虽然多了一个步骤，但胜在稳妥。
另外对于固定细胞利用预冷的乙醇，我的理解是：乙醇固定细胞，主要是利用乙醇脱水的作用。但乙醇除了脱水作用，还可以脱脂，脱脂作用的强弱和乙醇浓度以及温度有关（最佳的脱脂浓度是60%-80%，温度是室温或者稍高于室温）。用室温的乙醇对细胞进行固定，会导致细胞膜以及细胞核膜被溶解，影响检测结果。因此用乙醇固定细胞时，需要预冷乙醇，并且要在4摄氏度或者更低温度下固定细胞。 |
发表于 2023-7-16 01:57:33
发表于 2023-7-16 20:11:32
