分析小鼠神经元干祖细胞和神经元细胞

niwanmao

虽然大家对研究神经系统的干细胞和祖细胞有着极大的兴趣，但由于很难可靠地从干细胞中辨别祖细胞，研究进展受到影响。

2007年，David Panchision及其同事结合了抗CD133、CD15、CD24、A2B5和 PSA-NCAM 的抗体，从E13.5和 P2 小鼠 VZ/SVZ 中鉴定并富集了4类神经前体细胞。Fernando Janczur Velloso在2022年进一步扩展 Panchision 的研究，将 CD133 和 LeX 、 CD24 结合，然后加入两种中间祖细胞抗原，CD140a和NG2。在方案构建探索时，由于检测的所有细胞均表达CD24，并且 A2B5 也广泛存在，因此去掉了CD24 和 A2B5，最后的方案中含有4种细胞表面抗原。实验流程、设门逻辑如下图：



通过该策略，可以在侧脑室周围的脑室下区 (SVZ) 内识别出：NSCs、多潜能祖细胞 (MP)-1、MP2、MP3、MP4和血小板源性生长因子-成纤维细胞生长因子应答 (PDGF-FGF)-MP 细胞 (PFMP)。还可分出4种类型的双能祖细胞，包括双能神经元-星形细胞祖细胞 (BNAP) 和3种胶质限制性祖细胞 (GRP)-1、GRP2和GRP3。这些 GRP 同时产生“1型”星形胶质细胞和少突胶质细胞。真实设门案例如下图，更详细完整的步骤请参见底部参考文献1 ：



除了神经干细胞和神经祖细胞，大家平时对小鼠脑部神经细胞的流式检测也挺关注，Amy L. Kimble等人在2022年的Lab Invest.杂志上介绍了一种利用细胞核直接染色的方式区分神经细胞。主要是提取细胞核，并全程抑制RNAse活性，最后用抗Erg 647（克隆号EPR3864）、抗 NeuN Cy3（克隆号A60）、 DAPI 染色，分析如下图，NeuN+ Erg-的细胞核，对应的就是神经细胞：




参考文献：
Velloso FJ, Kumari E, Buono KD, Frondelli MJ, Levison SW. Analyzing mouse neural stem cell and progenitor cell proliferation using EdU incorporation and multicolor flow cytometry. STAR Protoc. 2021;3(1):101065. Published 2021 Dec 23. doi:10.1016/j.xpro.2021.101065
Kimble AL, Silva J, Omar OM, et al. A method for rapid flow-cytometric isolation of endothelial nuclei and RNA from archived frozen brain tissue. Lab Invest. 2022;102(2):204-211. doi:10.1038/s41374-021-00698-z