Treg和Breg的圈门

hydwl2019

CD4/CD25/FOXP3标记Treg，CD1d/CD5/CD19标Breg，请问怎么圈门比较好，先圈一个单阳再圈双阳还是先圈双阳再圈单阳？

hydwl2019

FOXP3选什么荧光素比较好，PE和APC属于大分子可能会使破膜后的染色效果差，胞内染色FITC又容易发生非特异性结合

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-24 12:56
FOXP3选什么荧光素比较好，PE和APC属于大分子可能会使破膜后的染色效果差，胞内染色FITC又容易发生非特异性 ...

设门，Treg建议先圈CD3+CD4++，再圈CD25+foxP3+，破膜效果与PE大小无关，而是与破膜剂有关。
Breg建议CD5+CD19+圈门之后，再圈CD19+CD1d+。

hydwl2019

niwanmao 发表于 2023-7-24 18:07
设门，Treg建议先圈CD3+CD4++，再圈CD25+foxP3+，破膜效果与PE大小无关，而是与破膜剂有关。
Breg建议CD5 ...

谢谢倪老师，这样作图的纵坐标怎么描述，Treg可以是CD25+foxP3+(% amongCD3+CD4+in spleen)，Breg可以写成CD19+CD1d+(% amongCD5+CD19+in spleen)吗

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-24 21:13
谢谢倪老师，这样作图的纵坐标怎么描述，Treg可以是CD25+foxP3+(% amongCD3+CD4+in spleen)，Breg可以写 ...

Treg的比例分母 可以是Th，也可以是总T。
Breg分母一般是总B。

hydwl2019

niwanmao 发表于 2023-7-24 21:25
Treg的比例分母 可以是Th，也可以是总T。
Breg分母一般是总B。

先圈CD3CD4，我是需要保证每个样品在这个门收的细胞一致吗，还是说一开始的去黏连去死细胞的细胞数量一致就行了

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-28 20:23
先圈CD3CD4，我是需要保证每个样品在这个门收的细胞一致吗，还是说一开始的去黏连去死细胞的细胞数量一致 ...

这个门收集的细胞数一致会比较好看，但不强求。但Th尽量达到5000~1万以上比较好。