使用flowjo时，如何根据对照样本设置阳性细胞率

Xueru · 发表于 2023-7-25 11:21:59

老师们，请问使用flowjo时，如何根据对照样本设置阳性细胞率，对照样本的阳性细胞率设置在多少范围内合适，有没有一个标准呀？

wxd · 发表于 2023-7-25 17:09:29

楼主要做什么实验？不同的实验有不同的对照的，比如检测细胞凋亡需要Annexin V单染和PI单染对照；检测细胞表型需要同型对照（只检测一个指标）或者单阳对照（多染）甚至FMO对照。它们的设置方法是不一样的。

Xueru · 发表于 2023-7-25 18:44:16

wxd 发表于 2023-7-25 17:09
楼主要做什么实验？不同的实验有不同的对照的，比如检测细胞凋亡需要Annexin V单染和PI单染对照；检测细胞 ...

单色的流式，检测的是细胞内因子，用的是同型对照，不知道在画门的时候阳性细胞率设置在多少合适

niwanmao · 发表于 2023-7-25 21:38:53

Xueru 发表于 2023-7-25 18:44
单色的流式，检测的是细胞内因子，用的是同型对照，不知道在画门的时候阳性细胞率设置在多少合适 ...

胞内因子，最合适的对照是未刺激细胞，相同步骤处理和染色。

阳性cut-off值没有硬性规定，一般根据密度确定边缘。

wxd · 发表于 2023-7-26 09:02:01

我们的经验，一般设置同型对照的阳性率不超过1%。

Yuck · 发表于 2023-7-26 14:31:35

是指阴性比率吗？一般都是1%，1左右时取小于1%

zdvfsadb · 发表于 2023-7-26 21:18:38

niwanmao 发表于 2023-7-25 21:38
胞内因子，最合适的对照是未刺激细胞，相同步骤处理和染色。

阳性cut-off值没有硬性规定，一般根据密度 ...

倪老师，请问用同样刺激的细胞，但是分别对自己感兴趣的细胞因子设置FMO可以吗？

niwanmao · 发表于 2023-7-26 21:22:25

zdvfsadb 发表于 2023-7-26 21:18
倪老师，请问用同样刺激的细胞，但是分别对自己感兴趣的细胞因子设置FMO可以吗？ ...

未刺激的生物学参照，是最佳选择。
FMO是其次。

zdvfsadb · 发表于 2023-7-27 02:48:11

niwanmao 发表于 2023-7-26 21:22
未刺激的生物学参照，是最佳选择。
FMO是其次。

好的，谢谢老师！

喃呢 · 发表于 2023-7-27 11:08:36

niwanmao 发表于 2023-7-25 21:38
胞内因子，最合适的对照是未刺激细胞，相同步骤处理和染色。

阳性cut-off值没有硬性规定，一般根据密度 ...

如果未刺激组也有细胞因子表达，那该怎么确定阳性门？

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