检测血浆细胞外囊泡，如何实现标准化检测？有人发明了一种校准试剂

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EVs是一种天然释放的细胞衍生物，存在于体液中，如血液和尿液。EVs的性质与疾病相关，因此被探索作为疾病的生物标志物。然而，目前在EV生物标志物研究中的一个主要障碍是测量结果在仪器和机构之间不可比较，这妨碍了建立多中心研究。多中心研究是临床生物标志物研究的先决条件。

EVs浓度测量结果不可比较的原因有四个：
- EVs发出的荧光和散射光信号很少，难以检测；
- 部分EVs的信号低于检测限制；
- 流式细胞术测量的信号是Arbitary Unit，难以量化和比较；
- 大多数EV样品中含有非EV颗粒，如血浆中的脂蛋白，数量超过EVs，与EVs重叠在大小范围内，可能被错误地识别为EVs。

为了标准化流式细胞术测量，需要对测量的荧光和光散射信号进行校准，将任意单位转换为标准单位。例如，荧光强度的任意单位可以与等效可溶性荧光染料分子（MESF）的标准单位相关联。光散射强度的任意单位可以与纳米级EV直径相关联。校准后的荧光和光散射信号可以在类似的检测范围内表达EV浓度。

荷兰的Britta Bettin等人开发了一种类似于血浆的EV测试样本（PEVTES），该样本具备以下特点：
- 类似于血浆中的亚细胞颗粒；
- 即开即用；
- 适用于流式细胞术；
- 稳定性好。

测试结果如下，(A)图是人血浆染色结果， (B–D) 是冻融PEVTES结果，可见两者之间结果相似，而且PEVTES不会受到残留血小板的影响。 （B）图是用二甲基亚砜（DMSO）、（C）图是用甘油、（D）图是用海藻糖保存PEVTES。三者保存效果均不错，而在三者之中，海藻糖在-80℃的储存条件下，最好地保护了预染色的PEVTES中存在的EV，其浓度在12个月的储存期间几乎没有下降。


信源：Bettin B, van der Pol E, Nieuwland R. Plasma extracellular vesicle test sample to standardize flow cytometry measurements. Res Pract Thromb Haemost. 2023;7(4):100181.