流式图分析问题

Ren

如图，纵轴是CD127，横轴是CD90，这是补偿调节后的图，在相同补偿下，大部分样本与左图一致，两三个样本与右图一致，请问各位老师，右图这种属于什么情况，是什么原因导致？

Ren

左图即上图，右图即下图

zdvfsadb

看起来像补偿没调好，你的左、右图里不止一种荧光素的含量/强度应该是存在较大差异的，可以把其他荧光素分别和横纵轴组合一下试试看，看看哪个偏得最厉害，再去手动改改补偿试试看

niwanmao

同样的抗体、同样的补偿，不应该这样的差异。

不知道大部分指的是多少个样本？从数据量来看，上图是更可靠一些，下图事件数如此之少，很可能是存在问题的。

Ren

niwanmao 发表于 2023-8-17 21:53
同样的抗体、同样的补偿，不应该这样的差异。

不知道大部分指的是多少个样本？从数据量来看，上图是更可靠 ...

十个样本，有八个是上图，两个是下图，大概这种比例，一批实验一样的操作一样的分析，另外也出现过结果是上下图叠加的样本。是不是流式机器的问题，感觉像是数据记录过程出错？

Ren

zdvfsadb 发表于 2023-8-17 18:43
看起来像补偿没调好，你的左、右图里不止一种荧光素的含量/强度应该是存在较大差异的，可以把其他荧光素分 ...

和其他荧光素组合看了一下，其他补偿基本是对的，没有明显的偏移

niwanmao

Ren 发表于 2023-8-17 22:38
十个样本，有八个是上图，两个是下图，大概这种比例，一批实验一样的操作一样的分析，另外也出现过结果是 ...

如果有可能，建议放两个各自的典型FCS文件上来看看。流式细胞仪不可能出这样的问题，这样的话，这种仪器也太不稳定了。

Ren

可能还是补偿的问题？我又调了一下

wmj123456

Ren 发表于 2023-8-18 10:27
可能还是补偿的问题？我又调了一下

下图是上图调节补偿后的图？这是单染CD90抗体的？如果是的话，下图中，CD90-和CD90+细胞在纵轴上比较一致，补偿感觉可以，但是直观看双阳的那一部分，再调节补偿应该是调不下来了，有排除非特异性信号吗？

你最开始发的下面那张图，应该是CD127-CD90，补偿减过了

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-8-18 07:31
如果有可能，建议放两个各自的典型FCS文件上来看看。流式细胞仪不可能出这样的问题，这样的话，这种仪器 ...

倪老师，如果是之前设置了一个电压条件，几天后，又设置了一个电压条件，一份新鲜的样本在旧的电压和新的电压条件下各测了一下，有些marker的百分比差异在5%，6%左右，这种情况也正常吧？

如果是仪器调节了光路，MFI会有些偏差，百分比理论上应该不会偏差很大吧？