激光信号问题

毛豆24821

各位战友好！
大家有没有遇到猴子或者小鼠样本的CD45，在调高流速后，阴性群扩散且往负轴偏移的现象。同样本的其他通道和marker没有这个现象。阳性群没有变化。且更换CD45的通道，情况是一致的。这怎么解释？是仪器有问题还是试剂有问题。同样样本的Blank的阴性群不会跟随上机流速变化
实验室用的是BD Fortessa, 抗体用的是BD或者Biolegend的。样本均过滤后上机，且流速小于七八千/秒，基本在小几千的流速。

niwanmao

通常如果流速影响CV，多数通道都会影响到。确实有点奇怪。

实在无法解释的话，只能降速获取了吧。

每秒7000-8000事件，如果确实都是细胞的话，是不是太高了？我平时不敢开这么高。

Yuck

BD厂家建议的稳定流速是400events左右吧我记得。

a86856635

什么类型的样品？样品处理过程能否也讲一下？CD45用了哪些染料？

毛豆24821

Yuck 发表于 2023-9-5 11:06
BD厂家建议的稳定流速是400events左右吧我记得。

因为我们常年样本很多，各种组织血液和细胞都有，所以流速太慢上机太慢了。一般都是五六千七八千上机的

毛豆24821

a86856635 发表于 2023-9-5 12:36
什么类型的样品？样品处理过程能否也讲一下？CD45用了哪些染料？

最近一次有问题的是猴子外周血，ficoll后染色上机，试的CD45两种通道是APC和BV421,BD的561290和740084。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2023-9-5 10:41
通常如果流速影响CV，多数通道都会影响到。确实有点奇怪。

实在无法解释的话，只能降速获取了吧。

我们样本量比较大，一般都是六七千七八千上机的，刚买的那两年都是一万多快两万上机的，可能因为这样所以机器状态就比较耗，毕竟是个用了四年多的中老年机器了。现在是如果遇到问题，得降速到一两千才能稳定。

a86856635

毛豆24821 发表于 2023-9-5 18:15
最近一次有问题的是猴子外周血，ficoll后染色上机，试的CD45两种通道是APC和BV421,BD的561290和740084。 ...

这2个染料分别是633 nm 405 nm下的第一个检测波段，本身信号强度就很高。CD45 高丰度抗原配强荧光，补偿会很大，阴性向负轴偏移，应该是补偿造成的，加上过高的流速放大了CV值。

范晋波

你的问题大概率是因为获取当下的细胞数过多，上样速度不单单指的是你在电脑上显示的细胞数多少，还包括你阈值切掉的碎片和死细胞，如果样本质量不好的话，被切掉的死细胞和碎片过多的话，依然还是会影响，也就是说，有可能你当下的上样速度，远超与7000.望有帮助

范晋波

Yuck 发表于 2023-9-5 11:06
BD厂家建议的稳定流速是400events左右吧我记得。

你这个说的是细胞周期。。。。