微球的问题

wmj123456

请教下各位老师几个关于微球的问题：

1在微球内部加入的染料和在微球表面偶联的染料，在经受激光照射的时候，发出的信号都是一样的吗？微球内部包埋的微球，会出现荧光淬灭，或者染料断裂的情况吗？
2如果先用裸球（内部有荧光素）跑流式，圈出所有的门的微球，得出球的位置和荧光强度。再把微球上捕获抗体（捕获抗体没有带荧光），跑流式，此时微球的门位置和荧光强度和裸球跑的会有差别吗？

niwanmao

在微球内部加染料？我没听说过呀，你指的是哪种呢？学习一下。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-9-10 14:08
在微球内部加染料？我没听说过呀，你指的是哪种呢？学习一下。

倪老师，在微球内部加染料，这个目前有厂家是这样的呀，比如像唯公的

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-9-10 22:26
倪老师，在微球内部加染料，这个目前有厂家是这样的呀，比如像唯公的

从唯公公开的资料看，没看到在微球内部加染料的，都是基于表面羧基等基团的：https://www.instrument.com.cn/news/20230426/662162.shtml

不知道能否分享一下相关资料？

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-9-11 09:37
从唯公公开的资料看，没看到在微球内部加染料的，都是基于表面羧基等基团的：https://www.instrument.com ...

倪老师，我有查到资料说，编码微球的制备方式，有在微球内部掺入染料的，有在微球表面加染料的，但是微球表面加染料，会占据结合表位。另外，下面这篇文章，看意思，也是指的这些都是在微球内部掺入的染料。https://mp.weixin.qq.com/s/uNb_ojNqqdd3xJoIP6NZGg

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-9-11 12:07
倪老师，我有查到资料说，编码微球的制备方式，有在微球内部掺入染料的，有在微球表面加染料的，但是微球 ...

这个就是在表面结合的呀

hannotech

专业的术语称内染和外染。这与荧光素的性质有关，比如说有的荧光发光的效率与离子强度，pH有关，有的无关。的有是亲脂的，有的是亲水的。都会影响到用哪一种工艺以及后续的应用。

至于说编码的微球，他们用的荧光不是APC，只是说在APC通道下检测。APC是一种蛋白荧光，接在球的表面，如果用这种蛋白来编码，后面的抗体就没地方连了。

wmj123456

hannotech 发表于 2023-9-19 16:33
专业的术语称内染和外染。这与荧光素的性质有关，比如说有的荧光发光的效率与离子强度，pH有关，有的无关。 ...

您的意思是，如果是内染的方式，市面上用APC单独来鉴定微球种类的，或者是用APC和APCCY7两种荧光来鉴定微球种类的，其实是用的染料，而这种染料的波长跟APC和APCCY7接近？这个意思吗？

hannotech

wmj123456 发表于 2023-9-19 22:27
您的意思是，如果是内染的方式，市面上用APC单独来鉴定微球种类的，或者是用APC和APCCY7两种荧光来鉴定微 ...

是的，“是用APC和APCCY7两种荧光来鉴定微球种类的，其实是用的染料”。 这类染料，每个厂家都是保密的，只会告诉您可以在APC通道检测。
如果涉及到定量，我们一般不建议用对buffer环境敏感的荧光。

JindongLi

1.第一个问题，如果两种方法染色的时候，每个球带的染料量不同，信号就会不一样。内部染色的球很稳定，放4度冰箱一年也没有什么问题。稳定性也和染料的性能有关系。
2.第二个问题，捕获抗体后的球和裸球荧光强度差别不大。所以门的位置也差异不大，前提是通道和增益要一样。