Alexa Fluor488的filter与mirror怎么设置

chujindong

实验中用到了Alexa Fluor488这一荧光素，但是默认设置里没有这一项。准备添加的时候要求设置Filter跟mirror，但是具体数值不知道是多少，不知道怎么弄。Alexa Fluor488的Ex max是495nm，Em是519nm，FITC的Ex max是494nm，Em是519nm.Filter是一样的，不知道mirror是不是也一样？如果设置完全一样的话就不用添加了吧？

niwanmao

chujindong 发表于 2011-9-19 10:45

                               
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实验中用到了Alexa Fluor488这一荧光素，但是默认设置里没有这一项。准备添加的时候要求设置Filter跟mirror ...

你是什么机器来着？怎么这么复杂。CELLQUEST里面都不需要设置这些东西。

经查询，是一样的：
Introduced in 1997, the Alexa Fluor® 488 dye is the first dye in 100 years to seriously challenge fluorescein’s dominance as the green-fluorescent dye of choice:

• A perfect spectral match for FITC filters—absorption—and emission profiles of Alexa Fluor® 488 and fluorescein are nearly identical, so there’s no need to change equipment, settings, or filters
  

http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/brands/Molecular-Probes/Key-Molecular-Probes-Products/alexa-fluor/Alexa-Fluor-488-Secondary-Antibodies.html

chujindong

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非常感谢，机器是FACSCanto，软件是Diva。有人跟我说不用调节设置，但是还不太放心，过来确认一下。

haven_t

理论上波长一样,滤光片都一样,在软件通道的设置也一样,直接使用FITC通道做就可以了吧,就像pi和pe能使用同一通道,关键是补偿.

niwanmao

chujindong 发表于 2011-9-19 16:40

                               
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非常感谢，机器是FACSCanto，软件是Diva。有人跟我说不用调节设置，但是还不太放心 ...

DIVA怎么搞的这么复杂啊，最近HAVEN_T的机器出问题也是CANTO，我都对这个CANTO失去信心了。本来明年还想买这款，这样子得考虑一下了。

chujindong

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我没用过Cellquest，一直用DIVA，感觉还好吧。因为我们这似乎一直没有专业的操作人员，所以软件什么的都没有设置完备。而且买了CANTO后，好像是可以自己选择安装哪一种的，不是强制安装DIVA的，似乎听人说过。可以咨询一下。