1管27色、1管20色，通过免疫细胞数量和功能，预测免疫检查点治疗效果

niwanmao

2023年9月7日一篇影响因子5.7分的文章中，Edwards JM等人用了两管20色以上的方案，来剖析接受免疫检查点阻断疗法的黑色素瘤患者全血中的 T 细胞，以确定可预测治疗反应的免疫表型生物标志物。

他们设计了两个方案——一个27色的“静息”方案来评估表面和细胞内 T 细胞标记物，一个20色的“活化”方案来测量刺激后细胞因子的产生。通过荧光素优化、抗体滴定等方式，使得方案得到优化后，用于分析15例黑色素瘤患者在开始免疫治疗前和16例健康对照的冻存血样。

整个研究方案在3个月内对11个批次的样本进行分别染色。为评估批次效应，每次检测时均对一份来自同一名供者全血分装样本进行重复检测以确认批间差，结果发现批间差异极小，因此无需归一化算法。

文中比较了黑色素瘤患者和健康对照之间的主要免疫细胞群为：

• 总淋巴细胞和主要淋巴细胞亚群：T细胞、B细胞、NK细胞
• T 细胞内：
  • αβT细胞vsγδT细胞
  • CD4 + vs CD8 + T细胞
  • 幼稚、记忆、调节、Tfh、Th1、Th2、Th17亚群
• 单核细胞亚群：经典、中间、非经典
• 粒细胞：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞

对于 T 细胞，使用两个优化的组合进行详细的免疫表型分析。静息管能够进行表面染色以识别谱系和记忆标记物，以及Ki67、颗粒酶B、EOMES等因子的细胞内染色。活化管用于评估 T 细胞过夜刺激后细胞因子的生成，如IFNγ、TNFα、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17。

下图为27色静息管的设门：


下图为20色活化管的设门：


结果发现，黑色素瘤患者和健康对照者之间免疫细胞群存在的关键差异是：

• 患者总淋巴细胞计数较低，主要是由于 T 细胞较少，尤其是初始CD4 + 和CD8 + T细胞数量减少。
• 虽然患者中调节性 T 细胞比例似乎增加，但可能是由于其他CD4 + 亚群减少所致，因为 Treg 绝对计数无显著差异。
• 患者在调节T 和记忆CD4 + 和CD8 + T细胞亚群中表现出 IL-2 和增殖标志物 Ki67 表达增加的趋势，表明更大的活化。
• 患者γδ T细胞表现出更终末分化的表型，CD57和转录因子 EOMES 有更高表达的趋势。
• 患者和对照组的 B 细胞、NK细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或单核细胞亚群总计数无显著差异。
• 与对照组相比，患者的淋巴细胞-单核细胞比值降低。

以上差异可能反映了黑色素瘤患者潜在的免疫失调。

参考文献：Edwards JM, et al. Design, optimisation and standardisation of a high-dimensional spectral flow cytometry workflow assessing T-cell immunophenotype in patients with melanoma. Clin Transl Immunology. 2023 Sep 7;12(9):e1466. doi: 10.1002/cti2.1466IF: 5.8 Q2 . PMID: 37692904; PMCID: PMC10484688.

DC_Cooper

有点吊  这个

tianshiyu

站长，请问血样如何冻存和解冻啊？对细胞活性影响大吗？谢谢！

niwanmao

tianshiyu 发表于 2023-9-25 10:26
站长，请问血样如何冻存和解冻啊？对细胞活性影响大吗？谢谢！

1、参考原文的methods部分
2、参考我们之前发过的：冻存的PBMC能用于流式检测吗？什么冻存和复苏条件最好？
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10448-1-1.html
(出处: 流式中文网)