用磁珠激活T细胞后的流式检测

wfjprs

最近在做T细胞激活实验，用T细胞激活磁珠激活PBMC中的T细胞，24h后去掉磁珠上流式。不知道为什么去掉磁珠后CD3+细胞的阳性很低而且分群不明显。

                               
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这个是没加磁珠刺激的对照组

                               
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这个是加了磁珠激活后，去掉磁珠的实验组，虽然CD25/CD69的双阳性很高，但是为什么CD3+细胞会出现这种情况？

yap

wfjprs 发表于 2023-9-21 14:00
刚刚图片没有上传成功，是有这个可能，但是我已经吹打挺久了，下次再吹打久一点试试，多谢 ...

我们有试过用不同浓度的anti-CD3/Cd28刺激T细胞，CD3抗体是coated 在板上一定时间后洗掉，然后培养细胞。流式上机时，高浓度CD3抗体处理孔的CD3分群就比低浓度孔差。

yap

可能是你激活磁珠没有清除干净，CD3位点依然被占据。

wfjprs

yap 发表于 2023-9-21 13:57
可能是你激活磁珠没有清除干净，CD3位点依然被占据。

刚刚图片没有上传成功，是有这个可能，但是我已经吹打挺久了，下次再吹打久一点试试，多谢

wfjprs

yap 发表于 2023-9-21 14:04
我们有试过用不同浓度的anti-CD3/Cd28刺激T细胞，CD3抗体是coated 在板上一定时间后洗掉，然后培养细胞。 ...

好的，非常感谢

Yuck

恩，以前遇到过，大概率是磁珠占据位点。后来想检测一下磁珠残留，也没找到好的方法。