多个样本同时检测的问题

chujindong

请教一下，第一次同时检测了几个标本，上机的时候遇到了问题：例如我在做CD348看CD4与CD8的比例的时候，先用一个人的细胞设好了电压、补偿，并且进行了分析，而其他几人并没有分别做各自的单阳性细胞，只做了三色同标的样本。上机的时候发现细胞的群落位置发生了变化，于是我调节了门的位置，其他的电压、补偿都没有调节。不太确定这样是否正确，不知道大家是怎么做的？

niwanmao

chujindong 发表于 2011-9-19 20:58

                               
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那么已设的门可以再调吗？比如设了三个门，如果原来的十字门不适合下一个标本，就需 ...

一般这些十字门也都不动，如果确实荧光发生了偏移，那么象我们在平时免疫分型中，就以这个标本中的内对照进行设置。例如：你检测CD4、CD8、CD3，而红细胞中肯定不表达这些标记，这时就可以用红细胞作为标准进行设置，因为来源于同一个标本，所以设置起来就能够反映出其非特异性结合的背景。所以，平时取的时候适当留一点红细胞，不能裂的太干净。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-9-19 17:32

                               
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请教一下，第一次同时检测了几个标本，上机的时候遇到了问题：例如我在做CD348看CD4与CD8的比例的时候，先 ...

一般不需要调节，该群细胞发生变化的因素很多，可能受到细胞状态、细胞对处理因素的敏感性等因素影响，但电压、补偿我觉得在同一批检测中还是应该固定的。

chujindong

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那么已设的门可以再调吗？比如设了三个门，如果原来的十字门不适合下一个标本，就需要调节了，而这时候的这个位置的调节就稍微有些主观了。对于分群明显的还好说，稍微有些偏差也没有什么，而对于分群不太明显的就很难掌握了。

haven_t

看过这个之后就觉得十字门其实不可靠，也知道做fmo的重要性了。三色可能感觉不大，但随着颜色越多，误差会不断累积，你就会抓狂了
http://drmr.com/compensation/index.html

niwanmao

haven_t 发表于 2011-9-20 09:44

                               
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看过这个之后就觉得十字门其实不可靠，也知道做fmo的重要性了。三色可能感觉不大，但随着颜色越多，误差会 ...

所以现在有些软件里面就提供那种雷达样的门图，防止在补偿调节不到位，或者补偿调节好到，轮到一个颗粒多的标本，某个抗原表达就冒上来了等情况时，十字门分析效果欠佳。

haven_t

niwanmao 发表于 2011-9-20 10:08

                               
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所以现在有些软件里面就提供那种雷达样的门图，防止在补偿调节不到位，或者补偿调节好到，轮到一个颗粒多 ...

那种设门方法只是缓和一下而已，如果仔细想起来是错误的，因为你的坐标是对数而不是线形，而补偿是线形运算，如果补偿错误在对数坐标系上应该是曲线分布，用直线来表示是错误的，不过如果样本表达不是连续的话是不会发觉的。

chujindong

haven_t 发表于 2011-9-20 11:48

                               
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那种设门方法只是缓和一下而已，如果仔细想起来是错误的，因为你的坐标是对数而不是线形，而补偿是线形运 ...

有书上说做免疫分型应当用对数放大更合适，不知你们是怎么做的？

haven_t

要看仪器的对数处理是在电路上还是在电脑上，如果在仪器上那么就只能用对数了，如果在电脑上还可以有logical和hyperlog选择。其实我想说的是说如果你是用肉眼通过图形来进行补偿调节的话，对数变换会影响你的判断，理论上正确的补偿应该是看荧光强度而不是看图形，尽管仪器说明书和技术支持都说通过图形设十字门进行补偿，但是这样会出现问题的，关于补偿的问题可参考http://drmr.com/compensation/index.html。

haven_t

以上两张图片均是同一标本免疫分型的对照，唯一不同的是坐标转换的方式，是否感觉第一张补偿没调好呢？其实补偿是正确的甚至轻微过补偿，证据就是第二张图，第二张就是logical转换了，请仔细看看坐标。