CD19 CAR-T细胞在回输第7天的绝对数，或能预测r/r DLBCL的CAR-T疗效

niwanmao

尽管 CAR T 细胞具有治愈潜力，但仍有大量患者无反应，因此，精确监测患者很有必要。

当前，在实际环境中，缓解效果的评估主要依赖于在CAR T细胞输注后1个月和3个月的放射学检查。然而，考虑到既往接受过大量治疗的患者一旦复发，病情往往迅速进展，因此，如果能提早检测到治疗失败将更为有利，这样便可以更早启动挽救性治疗，提高其有效性。

多项研究一致表明，CAR T细胞动力学对复发性或难治性r/r DLBCL患者的预后具有重要影响。目前各国学者已经开发出了多种用于定量检测外周血中CAR T细胞的生物分析平台，包括基于聚合酶链反应（PCR）、液滴数字PCR、流式细胞术以及无细胞DNA（cfDNA）的方法。然而，这些检测试剂盒中的大多数主要应用于临床试验和转化研究，而在许多治疗中心并没有用于常规诊断。

因此，Blumenberg V等人结合基于成像的评估方法，使用流式细胞术对体内CAR T细胞进行早期定量检测，以期能够更早识别对治疗无反应的患者，并启动在德国和西班牙的三个治疗中心的免疫监测项目。

在 Erlangen 大学医院 (n = 16) 和慕尼黑LMU(n = 47) 接受三线 axi-cel 或 tisa-cel 治疗 r/r DLBCL 的患者被回顾性纳入训练集，在巴塞罗那Vall d’Hebron大学医院接受治疗的55例患者被纳入验证集。 使用生物素化重组 CD19 蛋白的两步染色方法评估 CAR T 细胞。


训练集入组了28例“应答患者”(R) 和35例“无应答患者”（NR）。
通过使用 ROC 分析，第7天 CAR T 细胞显示出最高的显著性水平以及最高AUC，故确定了第7天19个CAR T细胞/µl，作为区分 R 和 NR 的cutoff值。此外，还发现第7天 CAR T 细胞水平与第30天治疗早期反应以及生存期相关。


那么，在第7天低于cut-off值的患者中， CAR T 细胞是否可能在后期时间点扩增，并仍影响有效性呢？作者进一步观察发现，这些低扩增患者从第7天到第14天 CAR T细胞水平的倍数变化更高，表明 CAR T 细胞确实后期还在扩增，然而，在7-14天这段时间里，NR和 R两组之间的倍数变化没有差异，这就支持了这么一个观点：极早期（即7天内）CAR T 细胞扩增对治疗反应有影响。

接着，作者进一步在验证集中验证第7天的cut-off值效能，ROC 分析显示，与训练集相比，验证集中cut-off值的灵敏度相同，特异性降低，Fisher精确检验显示预测值相似，同样，对数秩和检验显示高扩增组的生存期长于低扩增组。


与其他研究一致，NR中存在高疾病负荷（ECOG 和LDH）或高基线炎症（CRP 和铁蛋白），探索性研究发现，基线时 ECOG 和铁蛋白水平与第7天 CAR T 细胞水平呈负相关。值得注意的是，在整个队列的多变量分析中，第7天高于cut-off值的 CAR T 细胞水平仍然是治疗应答的显著变量。

更深入地了解对 CAR T 细胞治疗的耐药性是早期识别无法从抗-CD19 CAR T 细胞产品中获益的患者的先决条件，并指导为个体选择最有效的挽救治疗。我们的结果表明，在培训和验证队列中，CAR T细胞的早期定量，尤其是第7天 19个CAR T细胞/µl血液的cut-off值，是治疗反应和患者生存期的强预测因子。然而，尽管第7天 CAR T 细胞水平低于cut-off值，但一些患者仍有应答，因此建议在CAR T细胞低扩增组中使用挽救治疗，如来那度胺或免疫检查点抑制剂。

与早期治疗失败的各种其他预测标志物（尤其是 qPCR 技术）相比，该检测具有几个优势：

i）CAR T细胞输注后不久即可进行评估，使得临床能够更早开始补救治疗；

ii）快速、实时分析，方案易于重现，使这些试验在所有治疗中心均易于获得；

iii）持续监测 CAR 的表达，尤其是在 CD4 和 CD8 亚群分群、细胞分化的共表达谱和免疫检查点方面。

尽管如此，与 qPCR 相比，流式细胞术的灵敏度较低，这并不影响19个 CAR T 细胞/µl血液的cut-off值，因为这个数值明显高于流式细胞术检测的检测限。




参考文献：Blumenberg V, Galina B, Baumann S, et al. Early quantification of anti-CD19 CAR T-cells by flow cytometry predicts response in R/R DLBCL [published online ahead of print, 2023 Sep 25]. Blood Adv. 2023;bloodadvances.2023010364. doi:10.1182/bloodadvances.2023010364