T细胞体外刺激培养过程中活率过低

mengmengJ

用美天旎的Naive CD4 T细胞磁珠，纯化出初始细胞活率约90%，用anti-CD3(2.5ug/ml)，CD28(2.5ug/ml)和IL-2（10ng/ml）刺激活化增殖，CD3细胞是提前包被的。铺板细胞密度10^6/ml，培养2天，用AO/PI测活率就剩30%，求助战友这种活率正常吗，有没有解决办法？

niwanmao

是否可考虑只用1ug/ml CD3和5ug/ml CD28刺激？
参考资料：抗 CD3 和抗 CD28 活化 T 细胞

AAAAAjjj

我之前刺激时候用的CD3的浓度是2.5ug/ml，CD28的浓度是1ug/ml，IL-2的浓度是100u/ml，我用的IL-2是人来源的，这个也需要注意一下

一席繁荒

我用的是5ug/ml的CD3和CD28，提前24小时包被在24孔板里，包被体积也很重要，我用的是0.5ml

mengmengJ

一席繁荒 发表于 2023-10-10 09:03
我用的是5ug/ml的CD3和CD28，提前24小时包被在24孔板里，包被体积也很重要，我用的是0.5ml ...

是不是因为我包被体积比较小，导致细胞没有被充分激活呀，我用的200ul，48孔板

mengmengJ

niwanmao 发表于 2023-10-9 09:11
是否可考虑只用1ug/ml CD3和5ug/ml CD28刺激？
参考资料：抗 CD3 和抗 CD28 活化 T 细胞 ...

还没有试过这个配比，试过2.5/2.5，0.5/1，2/1，5/1，0.25/0.5，最后选的第一个，预实验的时候活率最高，在65%，正式实验又降到30%了，，，CD3和CD28的比例影响也很大吗，

mengmengJ

AAAAAjjj 发表于 2023-10-9 16:29
我之前刺激时候用的CD3的浓度是2.5ug/ml，CD28的浓度是1ug/ml，IL-2的浓度是100u/ml，我用的IL-2是人来源的 ...

战友请问你刺激3天后的活率有多少呀

mengmengJ

niwanmao 发表于 2023-10-9 09:11
是否可考虑只用1ug/ml CD3和5ug/ml CD28刺激？
参考资料：抗 CD3 和抗 CD28 活化 T 细胞 ...

之前做过加/不加IL-2，差别不大

mengmengJ

一席繁荒 发表于 2023-10-10 09:03
我用的是5ug/ml的CD3和CD28，提前24小时包被在24孔板里，包被体积也很重要，我用的是0.5ml ...

请问你们24孔板铺了多少细胞呀

AAAAAjjj

mengmengJ 发表于 2023-10-10 13:30
战友请问你刺激3天后的活率有多少呀

忘记了，去年的事情了，但是细胞状态镜下观察挺好的