OMIP-094：用于人外周血免疫细胞深度免疫表型分析的24色（30标记）方案

niwanmao

Pierzchalski A在2023年5月份的Cytometry A杂志上介绍了一种24色（30标记）方案，用于人外周血中免疫细胞亚型的综合分析。可同时分析中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、树突状细胞、固有淋巴细胞、各种 T 细胞亚群、B细胞、NK细胞和 NKT 细胞等，还可评估免疫细胞活化状态。为样本有限的纵向队列研究中的高内涵单细胞分析提供一种有价值的工具。

方案


主要设门逻辑

T细胞（CD3 + CD4+和CD3 + CD8+）的分化状态

用CD45RA，CD62L和CD27这三个标记定义初始（CD45RA+ CD62L+，CD27+）、中央记忆（CD45RA CD62L + CD27+）、效应记忆型（CD45RA- CD62L- CD27-）、过渡记忆型（CD45RA- CD62L- CD27+）和终末效应记忆（CD45RA + CD62L CD27-）T细胞亚群。

Treg

Treg细胞通过CD25（IL-2Rα）和CD127（IL-7Rα）分出，没有用FoxP3。Treg进一步通过CD39分成两群，其中CD39+的Treg可能与自身免疫性疾病（如多发性硬化）相关。

固有样T细胞

“固有样 T 细胞”包括MAIT和iNKT。

MAIT 细胞通过TCRα链的TRAV1-2(Vα7.2) 和CD161 共染进行分析。除粘膜外，这些细胞在全血中不算罕见，在细菌和真菌的免疫应答中发挥主要作用。

iNKT 细胞是一种非常规的、固有样的 T 细胞群，可识别以表达TCRVα24为特征的脂质抗原。尽管已知 iNKT 细胞因其大量且多样的细胞因子释放而介导多种免疫应答，但也可通过细胞毒作用发挥效应细胞作用。

γδ T细胞

γδ T细胞是固有免疫和适应性免疫系统之间独特的组成部分，其响应开始于适应性免疫之前。与多种自身免疫疾病有关，如系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、硬皮病、类风湿性关节炎和儿童特发性关节炎。活化的γδ T细胞表达CD16和CD56，特别是δ2 T细胞亚型。γδ T细胞可根据CD45RA、CD27和CD62L分出效应/记忆亚群。

NK细胞

通过CD56和CD16标记分析NK细胞，CD57是NK细胞成熟标记。

NKT-like细胞

NKT-like细胞是CD3 + CD56+细胞，与感染性疾病有关。

B细胞

通过CD27、CD38和IgD标记鉴定了不同类型的B细胞，包括naïve、边缘区样、记忆和浆细胞。同时，CD24和CD38的组合可以区分记忆、成熟naïve、浆细胞和调节性B细胞。

单核细胞

通过CD14和CD16的标记，可以分出不同的单核细胞亚群，包括非经典单核细胞、中间单核细胞和经典单核细胞。研究表明，在炎症和感染中，中间单核细胞和非经典单核细胞数量增加。

ILC

使用了一种以前已发表的策略来分析ILCs，ILCs被描述为Lin-（CD3/4/8/14/19-）CD127+细胞。再使用CD56，分出一种名为NK ILCs的ILC亚群。研究中使用了多种标记物来排除其他细胞类型，以确保对ILCs的准确分析。

DC细胞

通过HLA-DR、CD123和CD11c标记，分析树突状细胞亚群。浆细胞样树突状细胞（pDCs）被定义为HLA-DR+ CD123+细胞，髓样树突状细胞（mDCs）为HLA-DR+ CD11c+细胞。

为何加入CD177？

CD177表达在部分中性粒细胞和少量Treg中。CD177是中性粒细胞粘附内皮和移行的特异性标志物，而Tregs上的CD177表达在免疫调节疾病或癌症中也可能是至关重要的。

免疫细胞激活状态的标记物

包括了CD38、CD57、CD69、CD94、PD-1和HLA-DR。这些标记物可以用于研究化学物质对人类健康的影响，以及选择适当的动物模型进行进一步的研究。同时，这些标记物也可以用于研究不同癌症中的组织驻留性记忆T细胞的作用。


参考文献：Pierzchalski A, Zenclussen AC, Herberth G. OMIP-94: Twenty-four-color (thirty-marker) panel for deep immunophenotyping of immune cells in human peripheral blood. Cytometry A. 2023;103(9):695-702. doi:10.1002/cyto.a.24766