Th17 染色死细胞吗？

chujindong · 发表于 2011-9-20 16:45:23

本帖最后由 chujindong 于 2011-9-20 16:46 编辑

这是冻存的PBMC做Th17染色的结果，感觉很奇怪，不知道是不是细胞死的太多了？非特异性的结果是死细胞造成的吗?

空白

CD8-FITC IL17-PE

chujindong · 发表于 2011-9-20 16:50:08

图被挡住了，圈定的P1细胞与碎片的边界不明显，Q2区域有一峰。可以看一下附件。

Pictures.rar (9.79 KB, 下载次数: 10)

niwanmao · 发表于 2011-9-20 19:51:36

chujindong 发表于 2011-9-20 16:50

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图被挡住了，圈定的P1细胞与碎片的边界不明显，Q2区域有一峰。可以看一下附件。

...

你可以圈中这堆细胞，然后看它在FSC－SSC图上的位置分布如何。估计应该是。为什么用冻存过的PBMC做IL17呢？这样做有意义吗？

chujindong · 发表于 2011-9-20 21:32:26

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仪器有段时间不能用，所以标本冻起来了。我倒没有对比过新鲜的与冻存过的细胞的差异。有不少文献使用冻存的细胞做Treg的，有些发表到了很好的杂志上。

haven_t · 发表于 2011-9-20 21:57:34

建议复苏后用台盼蓝染一下看看怎样再做吧

niwanmao · 发表于 2011-9-20 22:04:50

chujindong 发表于 2011-9-20 21:32

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仪器有段时间不能用，所以标本冻起来了。我倒没有对比过新鲜的与冻存过的细胞的差异 ...

你的CANTO应该有紫外激发吧？可以用HOECHST 33342排除死细胞。

chujindong · 发表于 2011-9-21 14:01:17

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这个其实我已经做过几回了，感觉还可以，能看到Th17细胞

chujindong · 发表于 2011-9-21 14:03:08

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我试试吧。我以为是我经验不足，看不出死活细胞，原来光凭散点图无法判断啊？

niwanmao · 发表于 2011-9-21 14:53:46

chujindong 发表于 2011-9-21 14:03

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我试试吧。我以为是我经验不足，看不出死活细胞，原来光凭散点图无法判断啊？ ...

光凭FSC－SSC可以排除掉部分死细胞和碎片，但有些死细胞或碎片比较大，混到淋巴细胞或其它区域，用活性染料可以更好的排除掉它们。

chujindong · 发表于 2011-10-18 16:42:24

本帖最后由 chujindong 于 2011-10-18 16:53 编辑

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这是全血做的Th17细胞

感觉有非特异性染色啊
再看
xinxianxueTH17 p3.png

是新鲜血啊，应该不是死细胞，为什么会这样呢？以前也用同样方法做过的，没这样的。血用10%血清的1640培养过，应该是封闭了的。
P3被遮住了，在第二张图右上角。

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