做血小板多参数流式，要做好哪些分析前的准备？

niwanmao

流式细胞术可通过使用荧光探针同时测量血小板生物学多个指标，然而，分析前多个环节均可影响到血小板检测结果。Hindle MS等人评价了不同预分析条件对多参数流式细胞术测量血小板功能的影响，研究分析了4个关键的血小板活化标志物：纤维蛋白原结合测量整合素αIIbβ3活性，P-选择素评估α-颗粒释放，磷脂酰丝氨酸暴露指示促凝活性，CD42b作为血小板识别标志物。

抗凝剂：柠檬酸钠是最佳选择，因为其对激动剂的敏感性最高，基础活化最低。EDTA降低了灵敏度，而肝素增加了基础活化。如果没有柠檬酸盐抗凝剂的情况下，建议使用肝素抗凝剂作为第二选择。



样本处理时间：1.5-4.5小时的短暂延迟增加了基础活化并降低了灵敏度，表明样本应在采集后迅速处理。



样本类型：全血优于富血小板血浆和洗涤血小板，分离会造成人为活化。


样品储存：储存4.5小时后纤维蛋白原结合稳定，但 P-选择素和磷脂酰丝氨酸暴露下降，表明首选立即分析。

利用最佳的预分析条件，用降维和聚类技术分析血小板亚群。这确定了具有不同活化标记谱的表型不同的亚群。

总之，稳健的血小板多参数流式细胞术的关键建议是：使用柠檬酸盐抗凝剂，尽量减少样本处理时间，使用未分离血小板的全血，避免储存或标准化时间。仔细优化预分析因素能够实现高质量研究血小板生物学和鉴定新的亚群，为标准化和改善血小板功能测定提供了重要框架。



参考文献：Hindle MS, Cheah LT, Yates DM, Naseem KM. Preanalytical conditions for multiparameter platelet flow cytometry. Res Pract Thromb Haemost. 2023 Sep 20;7(7):102205. doi: 10.1016/j.rpth.2023.102205. PMID: 37854456; PMCID: PMC10579537.

btx362237729

4小时内检测，太严格了