细胞凋亡

zjl894150094

FCS.zip (787.38 KB, 下载次数: 2)

2023-10-26 23:10 上传

点击文件名下载附件
FCS原始文件

请问各位老师，我进行细胞凋亡检测时，图2中细胞的FSC-H通道为什么上面是直线；以及图三的PE通道为什么也有一条条横线？我用的仪器是BD LSRFortessa，细胞凋亡处理步骤按照碧云天的Annexin V试剂盒进行。

wxd

FSC-H的横线是由于你在检测时是以FSC-A为准调整的FSC通道电压，没有注意FSC-H通道的显示情况，导致信号强度超出仪器的检测限。对于超出检测限的信号，仪器会按照可检测的最大值记录。下一次调整电压时注意FSC-H的信号即可。
PE通道的横线是由于细胞仪检测软件和FlowJo对于同一个荧光强度范围内的信号检测精细程度不一致导致的。举例来说，检测软件可以将一个数量级（比如1-10）范围内的信号强度分为256份，而FlowJo则将同样范围内的信号分为1024份，没有额外算法的话，这个差异会导致FlowJo无法分析该仪器的数据。所以FlowJo会自动将仪器检测的信号强度数值乘以4以等比例放大信号。也就是说仪器中PE的荧光强度为4的信号，显示在了FlowJo中16的位置，而荧光强度为5的信号，显示在了FlowJo中20的位置，导致本来连续的信号再FlowJo中出现了空隙。由于对数坐标系的特点，这个现象在10以内特别明显。这个现象是正常的，你可以将PE通道设置为对数而不要使用双指数来进行改善，也可以直接用检测软件进行分析。

zjl894150094

wxd 发表于 2023-10-27 09:08
FSC-H的横线是由于你在检测时是以FSC-A为准调整的FSC通道电压，没有注意FSC-H通道的显示情况，导致信号强度 ...

明白了，谢谢老师的解答。