OMIP-098： 用于人类记忆NK细胞表型细分的26参数、24色方案

niwanmao

自然杀伤（NK）细胞是固有免疫系统的组成部分，是细胞毒效应细胞，在抗病毒和抗肿瘤免疫反应中发挥着重要作用。

NK 细胞可以在没有事先致敏的情况下快速发挥细胞溶解和免疫调节功能。一旦被活化，NK 细胞可通过多种机制清除病毒感染或肿瘤细胞，包括通过释放穿孔素、颗粒酶、免疫调节细胞因子和趋化因子直接发挥细胞毒性作用，或通过与 T 细胞和树突状细胞间接影响适应性免疫反应。

NK 细胞的功能活动受到一系列种系编码的活化和抑制受体的严格调控。这些受体之间的平衡决定了 NK 细胞的活化以及对压力、感染和癌症引起的变化的反应。

病毒感染后，个体的 NK 细胞受体谱系会发生重组，特别是活化受体 NKG2C 上调，抑制受体 Siglec-7 下调。

外周血 NK 细胞大多是成熟的细胞毒细胞，表型为系列标记阴性（CD3- CD19- CD33-）、CD56dim。另有较少比例的未成熟NK，表型为CD56bright，比成熟的 CD56dim NK 细胞产生更多的细胞因子和趋化因子，被认为是前体阶段。第三个亚群是功能耗竭的 CD56neg NK 细胞，这种细胞亚型缺乏 CD56 表达，细胞毒性降低，在慢性 HIV、巨细胞病毒（CMV）和 Epstein-Barr 病毒感染时扩增。

尽管 NK 细胞被认为是固有免疫细胞，但也能显示出适应性免疫的特征。最初的研究报道了在 CMV 感染中 NKG2C+ NK 细胞的扩增，而后来的研究则发现了在其他几种病毒感染中外周血中具有适应性特征的 NKG2C+ 记忆 NK 细胞。这些细胞的特点是对表达非典型人类白细胞抗原 E（HLA-E）的靶细胞反应增强。更有甚者，越来越多的证据表明，NK 细胞有可能发展成为长效的抗原特异性记忆细胞。

Creegan M等人设计的方案，使我们能够分析其中一些记忆性 NK 细胞亚群。适应性记忆 NK 细胞的特征是获得表型标记 CD57 和 NKG2C，而抑制性受体 NKG2A 的表达减少。

方案还包括了与 NK 细胞功能和分化相关的几种抑制性和激活性受体。如异二聚体 CD94/NKG2A 和 CD158  (KIR)。这些受体分别与非经典的人类白细胞抗原 E（HLA-E）和经典的主要组织相容性复合体分子相互作用，参与 NK 细胞的抑制和自我耐受的维持。

粘附抑制受体Siglec-7，主要表达在功能好的成熟 NK 细胞。Siglec-7 的表达减少已被认为是HIV 感染中 NK 细胞功能失调的早期标志，早于 CD56 的下调。

另一个抑制性受体是 ILT-2，也称为 LILRB1 和 CD85j。ILT-2 可与 MHC-I 以及 HLA-F 和 HLA-G 等非经典 MHC-I 分子结合。研究表明，阻断 ILT-2 可恢复慢性淋巴细胞白血病中 NK 细胞的功能。

天然细胞毒性受体（NCR），如 NKp30、NKp46 和活化共受体 NKp80，在触发 NK 细胞作用方面起着核心作用，在静息细胞和活化细胞中均有表达。这些 NCRs 表达的增加与 HIV-1储存库的减小有关，而表达的减少则会导致 NK 细胞细胞毒性受损。

NKG2A 和 NKG2C 与 CD94 形成异源二聚体，而 NKG2D 则与自身结合形成同源二聚体。CD94/NKG2A 在早期 NK 细胞中高度表达，与非经典的 HLA-E 配体结合会导致 NK 细胞受抑制。与此相反，作用受体 NKG2C 在成熟的 CD56dim NK 细胞上表达。

FcεRIγ缺陷记忆NK细胞（ΔgNK），缺乏跨膜信号适配体FcRγ表达，SYK激酶下调，对单纯疱疹病毒、CMV、HIV 和流感具有强大的抗病毒功能，并表现出长期持久性和独特的表观遗传学特征。与适应性 CD57 + NKG2C+ 记忆 NK 细胞相比，它们对细胞因子刺激的反应较弱，但具有更强的介导 ADCC 能力，这一特点可能对疫苗接种非常有益。

方案



设门



参考文献：Creegan M, Degler J, Paquin-Proulx D, Eller MA, Machmach K. OMIP-098: A 26 parameter, 24 color flow cytometry panel for human memory NK cell phenotyping [published online ahead of print, 2023 Oct 8]. Cytometry A. 2023;10.1002/cyto.a.24802. doi:10.1002/cyto.a.24802