流式染色

科研废物

请教各位老师：
1.请问表面染色的buffer可以用固定液（BD的cytokine Fix/Perm kit或eBioscience的FoxP3 Fix/Perm kit）稀释吗？

2.流式的固定破膜液能不能应用于免疫荧光染色？


3.为什么流式染色的步骤是先进行表染再固定/破膜，而IF或IHC是先固定再孵育啊

niwanmao

表面染色的Buffer，不知道你指的是哪个？通常如果浓缩型的，都是用蒸馏水稀释才对，为什么用固定液稀释呢？

免疫荧光染色步骤，和流式的会有比较大的不同，不建议混用试剂。所以2和3你应该要理解。至于3，流式也可以先固定再染表面，关键是流式的抗体通常都是针对天然表位构象，有些位点被固定之后，构象会发生改变，容易使抗体染不上；而免疫荧光和组化的抗体，本身就是针对福尔马林等固定过的构象，所以需要先固定。