小鼠外周血流式结果分析中遇到的一些问题

半雀

诸位好，最近初试流式，数据分析的时候发现细胞的分布位置有点怪，不知道是什么原因，想来请教一下


小鼠外周血淋巴细胞，ficoll分离，biolegend的抗体，破膜了
感觉不管是左图还是右图，细胞的分布都有点问题。
左图我是在试着圈出淋巴细胞的位置，因为我认为右上部分应该是粒细胞和单核细胞
但右图中为什么会斜呢？

半雀

这里还有离谱的CD4...左侧是样品管，右侧是空白，均未破膜，坐标设置都是一样的，不知道为什么会这样

niwanmao

分析的坐标没有设置好，导致分群看起来怪。

可把FCS文件压缩后传上来，我们看一下

半雀

niwanmao 发表于 2023-11-28 08:04
分析的坐标没有设置好，导致分群看起来怪。

可把FCS文件压缩后传上来，我们看一下 ...

谢谢倪老师，麻烦您了

范晋波

我刚简单看了一下，给以下建议，可供参考：1.先去做一下机器质控，看机器是否有问题；2.电压用空白优化一下，有一些压线比较严重；3.补偿错的太离谱了，重新做单燃管去调整。

niwanmao

半雀 发表于 2023-11-28 09:20
谢谢倪老师，麻烦您了

首先是补偿，不知道你们是如何把这两个补偿值拉到9000多和2000多的，这两个通道之间本身补偿就很小，如此巨大的补偿，所有的信号均将变形，请先清零：



其次，CD3没染出来，请注意排查：

半雀

范晋波 发表于 2023-11-28 11:49
我刚简单看了一下，给以下建议，可供参考：1.先去做一下机器质控，看机器是否有问题；2.电压用空白优化一下 ...

好的谢谢，我下午自己也看了其他的，确实有离谱的补偿....当天是老师代为上机的，以为直接分析没有问题
这周我再去试一下！

半雀

niwanmao 发表于 2023-11-28 15:22
首先是补偿，不知道你们是如何把这两个补偿值拉到9000多和2000多的，这两个通道之间本身补偿就很小，如此 ...

谢谢倪老师，我刚开始学分析结果，没想到去看补偿矩阵....但是下午的时候看另一组样品时也发现了6000+的补偿...我再看看！