T-NHL的诊断筛查中常用的TRBC1，正常参考值是多少？实际筛查T-NHL效果如何？

niwanmao

诊断T细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)对临床和病理均是一个挑战。所有非霍奇金淋巴瘤中约有10% -15%是T细胞或自然杀伤(NK)细胞起源(Jiang等，2017)。根据世界卫生组织的分类，这些肿瘤包括“T细胞和NK细胞淋巴样增生和淋巴瘤”名称下的各个分类(Alaggio等人，2022;Swerdlow et al.， 2016)。诊断依赖于在临床环境中识别异常T细胞的形态、表型改变。然而，由于与反应性T细胞的重叠特征和现有诊断方法的局限性，病理T细胞的鉴定往往很困难(Herrera et al.， 2014)。

T-NHL的异常T细胞可以通过几个参数来识别，细胞的大小和复杂性经常增加，组织结构常被破坏(Laurent et al.， 2017)。免疫表型多变的，但谱系标记有时丢失，包括CD3、CD4、CD7或CD8。某些特殊T-NHL类型可能表达CD10、CD25、CD30或PD-1等标记物。即使有较多免疫组化标记帮助，仍有15% -20%的病例的组织病理学较难得到明确的诊断，导致潜在的误诊或错误分类(Hsi等人，2014;Laurent et al.， 2017)。

在形态或免疫表型不清楚的情况下，建议对T细胞群进行克隆性评估(Fanny et al.， 2020)。T细胞的克隆性主要通过Vβ- γ重排的分子生物学检测来评估(Mahe et al.， 2018)。然而，T细胞克隆的测定也有局限性。它需要解释性专业知识，灵敏度有限，而且其成本使许多实验室无法使用。

Vβ- γ重排测定的另一种选择是T细胞受体(TCR) β恒定区(TRBC)的评估。由于成熟T细胞表达TCR只表达两个恒定区域(TRBC1或TRBC2)中的任何一个，故该方法开启了使用流式细胞术对成熟T细胞恶性肿瘤进行低成本、快速和特异性克隆检测的可能性(Horna, Shi等，2021;Maciocia et al.， 2017;Novikov et al.， 2019)。与成熟b细胞恶性肿瘤中的kappa或lambda轻链限制类似，T细胞NHL也表现出TRBC1或TRBC2的限制。这一发现显示了在T细胞克隆性评价方面有希望的结果。

流式细胞术检测TRBC1的灵敏度为96%，与分子Vβ- γ评估的相关系数为0.999 (Mu ñoz-Garc ía et al.， 2021)。

但是，如何将其整合到T-NHL的诊断筛查中尚没有一个明确的标准。

智利的Felipe Castillo等人使用抗TRBC1单克隆抗体对血液、骨髓、胸膜液和组织样本（健康人10份，可疑患者样本59份）进行了前瞻性分析，给了我们一些答案。

TRBC1正常参考值

下面均为99.7%的置信区间

CD4+ T细胞中 TRBC1表达正常百分比的区间为29.4-54.6%，CD8+ T细胞为23.9%-52.1%。


CD4+ T细胞的TRBC1+/TRBC1-比值的正常范围为0.33-1.1，CD8+ T细胞的正常范围为0.22-1.0。



患者样本中TRBC1表达

59份样本中有18个(30.5%)出现TRBC1的限制性(单型)表达，其中单型性阳性6/18(33.3%)，单型性阴性12/18(66.6%)。

最后，这18例中有15例(83.3%)经临床和/或组织病理学检查最终确诊为T细胞肿瘤。而那3个不一致的病例中，第一个是来自纵隔肿块核心活检的组织样本，流式细胞术显示CD8阳性克隆为主，TRBC1单型阳性表达，最终活检显示肺腺癌。第2例和第3例是来自同一患者的两个样本。一个是胸膜组织，另一个是胸膜液，流式细胞术检测，两种样本中T细胞均为TRBC1单型性阴性，cCD3表达，CD7部分表达，CD30和CD38表达，胸膜组织活检证实原发性渗出性淋巴瘤(PEL)。

下面是两个患者实例

SS患者外周血（PB）样本中 TRBC1 表达，肿瘤 T 细胞（红色）为CD7-、sCD3（弱）、CD4+、CD45+ 和表面TRBC1（略弱于正常T），正常 T 细胞的亚群用灰色表示，多型性表达TRBC1：



T-LGLL患者骨髓（BM）样本中 TRBC1 表达。肿瘤性 T 细胞（红色）为表面CD3+、CD8+、CD45+ 和表面膜TRBC1-。正常 T 细胞的亚群用灰色表示，多型性表达TRBC1：



未来的探索

细胞内TRCB1 (cyTRBC1)的评估可以为T细胞前体肿瘤的克隆性提供高度敏感和特异性的评估。急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆显示cyTRBC1限制，这在正常胸腺细胞中未见(Horna et al.， 2022;Wheeler et al.， 2022)。在该研究中，没有纳入疑似T-ALL的患者。

有报道称，在那些表面失去CD3的情况下，有必要使用CD45RA和CD45RO来评估分化轨迹中的克隆性(Pu et al.， 2022)。

未来的研究方向包括对TRBC2的必要评价。几个研究小组正在开发抗TRBC2单克隆抗体(Maciocia等人，2018;Onuoha et al.， 2018)。该抗体可能会提高流式判断T细胞克隆的敏感性和特异性，就像目前常规克隆B细胞鉴定中的kappa和lambda免疫球蛋白轻链。虽然尚未商业化，但有一组报道了对JOVI.1克隆的修饰，将其特异性从TRBC1改变为TRBC2 (Ferrari et al.， 2020)。

参考文献：Castillo F, Morales C, Spralja B, Díaz-Schmidt J, Iruretagoyena M, Ernst D. Integration of T-cell clonality screening using TRBC-1 in lymphoma suspect samples by flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. Published online November 27, 2023. doi:10.1002/cyto.b.22147

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