关于使用流式技术进行细胞代谢（胞内ATP含量）检测的问题

半雀

如题，老师让我了解一下有没有方法可以对胞内ATP含量进行检测，希望看一下T细胞代谢水平，她说印象中医院里可以用流式相关技术进行，但我看到的方法似乎都不太可行，所以来向大家请教。


以下是一些具体情况及问题分析：

①已知的一些ATP含量测定试剂盒如荧光素酶法、化学发光法，都是通过对ATP含量测定进行细胞增殖活力分析。也就是说，这种方法默认不同处理下的细胞平均ATP含量相同，以此进行细胞计数分析增殖活力。个人觉得这种方法即使用细胞计数仪大致确定细胞数，也无法反推出各处理组的ATP含量差异

②希望分析的样品是动物取材后分离得到的T细胞，质粒转染插入ATP探针的方法会不会因为长时间的培养而影响结果，无法获知细胞在体状态信息？

③如果没有合适的流式技术检测方法，还有哪些方法可以定量/半定量检测细胞内ATP以反映其代谢水平呢？HPLC可以吗？

如果有相关的其他信息也请大家不吝赐教

半雀

代谢分析仪、液质联用好像可以，期待大家的指点和补充

niwanmao

液相色谱：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3907277/pdf/368.pdf

流式的话，需要基于FRET原理构建Reporter：https://www.bio-protocol.org/exc ... ?type=3&id=1034

半雀

niwanmao 发表于 2023-12-7 08:52
液相色谱：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3907277/pdf/368.pdf

流式的话，需要基于FRET原 ...

谢谢倪老师，现在看到的方法里，安捷的ATP生成速率试剂盒和HPLC应该是可以考虑的，转质粒确实就有点麻烦了

niwanmao

半雀 发表于 2023-12-12 08:58
谢谢倪老师，现在看到的方法里，安捷的ATP生成速率试剂盒和HPLC应该是可以考虑的，转质粒确实就有点麻烦 ...

看需求吧，如果测整体的ATP变化，HPLC就可以解决。但是如果测某个亚群的，流式还是一个比较好的选择。