CD3+T有些奇怪

wmj123456

外周血检测CD3/CD4/CD8，免洗。结果发现FSC和SSC中碎片多，CD3+T比例很低很低，而且CD3+的细胞群位于FSC-A和FSC-H去粘连时候，粘连体的位置，有几个问题想请教下：
1碎片多是因为裂红不充分吗？用FSC切的阈值，8万，有计数微球，阈值还可以进一步加大吗？如果样本处理的好，碎片减少，就能增加CD3+的比例了吧？ 2为什么CD3+细胞位于像粘连体的位置？ 希望得到各位老师的帮助。

Merci

淋巴门圈错了吧

wmj123456

Merci 发表于 2023-12-8 08:23
淋巴门圈错了吧

嗯，圈错了，这一群很奇怪啊，不知道是什么。。。。。用FSC-A和FSC-H圈门的时候，在FSC-A大的位置，但是又在fsc大的地方

niwanmao

没看到过这类现象，FSC/SSC散点图，左上角那些信号有点奇怪，你加过微球吗？

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-12-11 08:39
没看到过这类现象，FSC/SSC散点图，左上角那些信号有点奇怪，你加过微球吗？ ...

是的，左上角那一数列的是微球

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-12-11 12:36
是的，左上角那一数列的是微球

你多做几个看看，是否都出现这种现象，还是就这个样本

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-12-11 15:42
你多做几个看看，是否都出现这种现象，还是就这个样本

倪老师，多个样本都出现了FSC靠右边的那一群，通过反圈，这群细胞在cd3-和碎片重叠的部位。如果加大CD3-Percp的阈值，这一群会减少。我感觉是样本制备的问题吧？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-12-18 09:10
倪老师，多个样本都出现了FSC靠右边的那一群，通过反圈，这群细胞在cd3-和碎片重叠的部位。如果加大CD3-P ...

FCS文件压缩一下，传上来看看吧

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-12-18 09:24
FCS文件压缩一下，传上来看看吧

倪老师，外周血，CD3是PerCP，CD4-FITC，CD8-PE，谢谢您帮忙分析

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-12-18 21:46
倪老师，外周血，CD3是PerCP，CD4-FITC，CD8-PE，谢谢您帮忙分析

红色这群就是你感觉疑惑的细胞，从FSC-A/H来看，既有点偏离单细胞区间，又不符合粘连体分布，所以准确形成原因还说不好，但无论如何这些信号是需要抛弃的