大鼠原代肝提取

htw981123

想问下，我们用索莱宝的IV胶原酶处理新鲜的大鼠肝脏，采用的是麻醉后摘除整个肝脏，dmem清洗后，剪成2-3mm的组织块，取5-6块，重量约为0.25g，加入1ml的配置好的胶原酶，放在37度水浴锅消化15min后，取出在70um的滤网上研磨，dmem冲洗滤网，50g，离心2min后弃上清，1mldmem重悬，aopi计数活率20-30%，这是正常的么？麻烦各位老师帮忙看下有什么问题

niwanmao

肝脏组织通常较脆，研磨时容易被破坏，你先尝试从研磨上减小力度看看效果

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niwanmao 发表于 2024-1-17 15:21
肝脏组织通常较脆，研磨时容易被破坏，你先尝试从研磨上减小力度看看效果 ...

好的，研磨力度能保证是不重的，您看还有别的可能性么？

niwanmao

htw981123 发表于 2024-1-17 16:37
好的，研磨力度能保证是不重的，您看还有别的可能性么？

1、酶的种类
2、酶消化时间
3、研磨方法

主要是这几个因素，如果确实无法改善，只能通过死活排除掉死细胞，再进行分析

htw981123

niwanmao 发表于 2024-1-17 20:00
1、酶的种类
2、酶消化时间
3、研磨方法

好的谢谢您！