OMIP-101:27色方案用于分析固定全血中主要免疫细胞

niwanmao

免疫学研究中，流式细胞术起到了至关重要的作用，可以帮助我们鉴定和了解不同的免疫细胞群。然而，随着对免疫细胞认识的不断深入，设计一个完美的流式细胞方案变得有些棘手。

最近在Cytometry杂志上OMIP-101，Imbratta C等人分享了一个经过优化的27色流式细胞方案，能够全面地分析人体血液中的主要免疫细胞。

方案


设门
层级设门策略，见图释和箭头指向：



特色
1、同时涵盖髓系和淋巴系
该方案可分析主要的髓系细胞群，如粒细胞、单核细胞和髓系树突状细胞（DC）。同时，也可分析所有主要的淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和固有淋巴细胞（ILCs）。

2、区分T细胞亚群
对于T细胞而言，该方案可以区分常规的CD4+和CD8+ T细胞、黏膜相关的不变T细胞（MAIT细胞）、不变NKT细胞和γδT细胞。

3、定义细胞的分化状态
通过一些标志物如CCR7、CD27、CD45RA等，可分出初始细胞、记忆细胞和效应细胞。

4、分析细胞的功能
细胞因子受体、细胞毒性蛋白和活化标志物的水平可以反映不同细胞类型的增殖能力、杀伤感染细胞的能力以及产生免疫应答的能力。

5、适用于固定的全血样本
该方案一个很大的优点是，即使在使用固定冻存全血样本时，也能得到可靠的结果。如此，在大规模临床试验和多中心研究中具有很高的实用性，因为冻存样本可以简化处理过程。

性能
- 方案覆盖了95%的循环白细胞
- 使用 CD161 和TCR Vα7.2代替四聚体优化 MAIT 细胞的分群能力
- 通过 IgD 和 CD27 表达区分B细胞记忆亚群
- 通过细胞内穿孔素和颗粒酶B分析NK细胞和T细胞的细胞毒性能力
- 通过与新鲜全血样本的结果进行比较，验证方案


这管全面的27色方案，能够实现深度和实用的免疫细胞谱分析。既可用于新鲜全血，或是基于冷冻保存前红细胞裂解和精确体积固定，也可用于PBMC。对于检测错综复杂的免疫微环境变化将是至关重要的。

参考文献：Imbratta C, Reid TD, Toefy A, Scriba TJ, Nemes E. OMIP-101: 27-color flow cytometry panel for immunophenotyping of major leukocyte populations in fixed whole blood. Cytometry A. Published online February 11, 2024. doi:10.1002/cyto.a.24827IF: 3.7 Q2
OMIP-101.pdf (1.09 MB, 下载次数: 45)

2024-2-18 22:09 上传

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Veblen

老师可以具体讲一下画门策略吗，红字标出的能看懂，其他画门有些不太能懂。
另外，B细胞的亚群仅画了门，具体亚群并未标出。
还有不明白CD32在这个panel的的意义。
谢谢啦

niwanmao

Veblen 发表于 2024-2-21 23:52
老师可以具体讲一下画门策略吗，红字标出的能看懂，其他画门有些不太能懂。
另外，B细胞的亚群仅画了门，具 ...

CD24、CD38高表达的Transitional B
其它是常规B


Fc 介导的功能在疫苗接种后预防疟疾中的作用，故作者在方案中纳入了两种 Fc 受体 (FcR)，CD32和CD16

Veblen

niwanmao 发表于 2024-2-22 16:06
CD24、CD38高表达的Transitional B
其它是常规B

谢谢，明白了，一点就懂了

Veblen

还想再问问老师， 为什么γδTCR细胞中，Vδ2+细胞会分成两群？是不是因为Vδ2+中还有两个亚群？

niwanmao

Veblen 发表于 2024-11-24 09:11
还想再问问老师， 为什么γδTCR细胞中，Vδ2+细胞会分成两群？是不是因为Vδ2+中还有两个亚群？ ...

这里没有进一步对Vδ2分群，暂时只能看到抗体染色强度上的差异。Vδ2里面主要是Vγ9+，是主要群体，另有一小群Vγ9-的。

Veblen

niwanmao 发表于 2024-11-24 10:11
这里没有进一步对Vδ2分群，暂时只能看到抗体染色强度上的差异。Vδ2里面主要是Vγ9+，是主要群体，另有一 ...

嗯嗯，明白了，谢谢老师。
顺便作下笔记，下次再看时能够知道
γδT细胞主要分为三个亚群：Vδ1T细胞，Vδ2T细胞和Vδ3T细胞。Vδ1T细胞主要存在于粘膜上皮细胞中，Vδ2T细胞主要分布在外周血中，Vδ3T细胞主要分布肝和肠。
Vδ2 T细胞主要分布在血液和淋巴系统中，是健康人类中发现的主要亚群。它占外周血γδT细胞群的50%-90%。Vδ2T细胞分为先天样（Vγ9 +）和适应性（Vγ9-）亚群，大多数Vδ2T细胞为Vδ2Vγ9 + T细胞。

Veblen

再想问问老师，我看图中有很多CD27与CD57组合的双参数图，很想知道CD27-CD57-,CD27+CD57+,CD27-CD57+以及CD27+CD57-这几群细胞分别是什么细胞呢？大致有什么作用？
Thanks~

niwanmao

Veblen 发表于 2024-11-25 15:05
再想问问老师，我看图中有很多CD27与CD57组合的双参数图，很想知道CD27-CD57-,CD27+CD57+,CD27-CD57+以及CD ...

CD27：TNF受体超家族成员，共刺激分子
CD57：终末分化标志物

A. CD27+CD57-（早期效应细胞）
T细胞中：代表初始T细胞和中央记忆T细胞
具有较强的增殖能力
分泌IL-2等细胞因子
存活时间长，具有记忆功能

NK细胞中：代表未成熟NK细胞
细胞毒性相对较弱
具有较强的增殖潜能
分泌细胞因子能力强


B. CD27+CD57+（过渡态细胞）
T细胞中：代表向终末分化过渡的效应记忆T细胞
具有一定的增殖能力
开始获得细胞毒性功能
仍保留部分记忆特性

NK细胞中：具有双重特性
平衡的细胞毒性和细胞因子分泌能力
中等程度的增殖能力


C. CD27-CD57+（终末分化效应细胞）
T细胞中：完全分化的效应性T细胞
强大的细胞毒性
高表达粒酶B和穿孔素
增殖能力低
更容易发生衰老和凋亡

NK细胞中：成熟NK细胞
强大的细胞毒性功能
ADCC效应强
细胞因子分泌能力相对减弱


D. CD27-CD57-（耗竭细胞）
T细胞中：可能代表功能耗竭的T细胞
增殖能力下降
效应功能减弱
可能高表达抑制性受体


NK细胞中：可能是应激状态下的NK细胞
功能状态需要进一步研究




这种分类方案反映了免疫细胞的：
分化状态
功能特性
免疫应答能力


临床应用价值：
免疫状态评估
疾病诊断和预后判断
免疫治疗效果监测
衰老相关免疫功能评估


但是，这种分类并非绝对，细胞可能在不同状态间转化；不同个体间比例可能存在差异；在疾病状态下，各亚群比例可能发生显著改变

Veblen

niwanmao 发表于 2024-11-25 16:30
CD27：TNF受体超家族成员，共刺激分子
CD57：终末分化标志物

嗯嗯，明白了很多，很详细。很多时候看多色分析，根本不懂各群细胞的含义，您的解释，让我理解得更透彻和清晰，感谢老师。