求助，ki67检测检测比例高如何解决

songlei

小鼠样本。请问是非为ki67非特异性结合？如何解决？

空白管

ki67单染


fmo-ki67

实验组

niwanmao

1、确认方案组成，有无相邻通道的干扰？
2、整体看，似乎染色本身就存在问题，连CD3都没分开，故需从操作和固定、破膜等上也找一下原因

songlei

niwanmao 发表于 2024-2-23 10:45
1、确认方案组成，有无相邻通道的干扰？
2、整体看，似乎染色本身就存在问题，连CD3都没分开，故需从操作和 ...

收到，谢谢老师

songlei

songlei 发表于 2024-2-23 11:13
收到，谢谢老师

操作上出现啥问题会导致CD3分不开，我们用胶原酶IV消化肿瘤组织制备单细胞悬液，然后过了Ficoll，先染zombie，再染表面，再透核，再染核内marker，如果操作有问题的话，可能是哪步？透核用的buffer是eBioscience™ Foxp3/转录因子流式固定破膜缓冲液

范晋波

冒昧的问一下，你这是什么标本？脾脏？

songlei

范晋波 发表于 2024-2-23 12:39
冒昧的问一下，你这是什么标本？脾脏？

是的小鼠脾脏

niwanmao

songlei 发表于 2024-2-23 11:20
操作上出现啥问题会导致CD3分不开，我们用胶原酶IV消化肿瘤组织制备单细胞悬液，然后过了Ficoll，先染zom ...

如此看来，CD3是因为消化的缘故

FMO那管，是否同样进行了固定、破膜呢？

songlei

niwanmao 发表于 2024-2-23 13:44
如此看来，CD3是因为消化的缘故

FMO那管，是否同样进行了固定、破膜呢？ ...

是的吗，都是同样的处理方式，是因为胶原酶处理导致的吗？

范晋波

songlei 发表于 2024-2-23 12:50
是的小鼠脾脏

正常来讲  小鼠脾脏不该有那么多CD45阴性才对，可以考虑消化引起的样本问题，而且如果细胞状态好，前侧向应该会比较聚集

songlei

范晋波 发表于 2024-3-1 08:41
正常来讲  小鼠脾脏不该有那么多CD45阴性才对，可以考虑消化引起的样本问题，而且如果细胞状态好，前侧向 ...

收到，谢谢。我也在考虑是不是消化的问题