CPHEN-07：人内皮细胞及其亚群表型分析

niwanmao

内皮细胞整齐地排列在血液和淋巴管的内部，在血管健康和功能中起着关键作用。流式可对这些细胞进行表型分析，为研究和临床应用提供了有价值的见解。

在内皮表型分析时，需要注意以下10个关键点：

1、设门策略
就像小鼠细胞一样，人类内皮细胞的设门策略从泛内皮抗原开始，同时也需要排除造血细胞等不需要的群体。不同物种之间的排除标记有所不同。对于人类，常见的排除性标记包括间充质细胞的CD90 和红细胞的CD235a。

2.人与小鼠泛内皮标记物的异同
虽然大多数泛内皮标记物在人类和小鼠之间是通用的，但有一个关键的标记物-Uea-1是人特异性的。其他通用的泛内皮标记物包括CD31、CD34、CD105和CD146。

3、内皮细胞存在器官特异性表型
由于其功能特殊，不同器官/组织的内皮细胞具有不同的形态和特性。下表列出了常用的组织特异性人内皮标记物：


4、循环内皮细胞显示血管健康
在外周血中发现的循环内皮细胞 (CEC) 是一种罕见但具有临床相关性的细胞群。如下图所示，使用死活染料、排除性标记物和泛内皮标记物进行逐级设门可以识别出这些细胞，这为系统性内皮功能障碍或损伤提供了依据。CEC 计数升高与肺高压、硬皮病甚至重度 COVID-19 等疾病相关。



5、进行更深入的表型分析
对于更特殊的亚群，可使用下表中其他亚群特异性标记物的组合。这些标记定义了干性、血管类型/大小、血管生成状态等，能够进行丰富的表型分析。


6、可诱导标记指示激活/损伤
组成型和诱导型标记均可对人 ECs 进行表型分析。可诱导的E-选择素和 VCAM-1 是人内皮细胞特异性的，表明对炎症刺激或损伤反应的内皮功能障碍。

7、组织消化方案问题
当对实体组织中的内皮细胞进行表型分析时，请反复验证您的组织解离方案。不正确的消化可能导致特定亚群标记物的丢失或结果偏倚。

8、癌症内皮细胞可能会出现异常
对于癌症研究，建议使用多个泛 EC 标志物，因为肿瘤血管内皮通常会出现异常表型。依靠单个泛内皮标记可能会遗漏重要的亚群。

9、标记表达可因血管而异
一些标记物如 eNOS 和 PV-1 表现出依赖于特定血管（如动脉、静脉或血脑屏障等）的差异表达模式。

10、富集更纯粹的亚群，建议分选
如果需要非常纯的内皮亚群，应该使用流式分选或其它分选方法，而不是仅仅依靠排除性标记排除非内皮细胞。


综上所述，人内皮细胞的全面流式表型分析不仅需要仔细选择泛内皮标记物，还需要正确选择针对特定实验问题和生物来源定制的亚群特异性抗原、可诱导标记物和方案的组合。




参考文献：Grant, Dillon et al. “Comprehensive phenotyping of endothelial cells using flow cytometry 2: Human.” Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology vol. 99,3 (2021): 257-264. doi:10.1002/cyto.a.24293