求助！JC-1流式检测分群问题

plmokn

我的JC-1检测流式结果图如下图（已调节补偿）：

                               
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请问分群是否正确？为什么Q1和Q4象限有较多比例的细胞呀？我看别人的图在Q1和Q4几乎没有什么细胞了/(ㄒoㄒ)/~~若是计算red/green比值是用Q2/Q3吗？感谢！

niwanmao

看不到你上级设门情况，是否因为电压不够，导致没跑出来，实际上不应该设十字门，而是根据正常样本的位置，在其右下设凋亡门的

plmokn

niwanmao 发表于 2024-3-2 13:23
看不到你上级设门情况，是否因为电压不够，导致没跑出来，实际上不应该设十字门，而是根据正常样本的位置 ...

感谢老师回复，我的细胞是纯化的人骨髓来源MSC，上一级设门就是圈出MSC并去粘连。下图是我用相同的模板跑出来的另一个人的样本，Q1细胞就几乎没有了，不知为何样本间差异这么大。。。若是我用PE MFI/FITC MFI来得到red/green比值是否可以？这样可以免除圈门这一步

niwanmao

plmokn 发表于 2024-3-2 19:56
感谢老师回复，我的细胞是纯化的人骨髓来源MSC，上一级设门就是圈出MSC并去粘连。下图是我用相同的模板跑 ...

这个图是有问题的，Q4竟然有31％的信号

JC-1的结果分析，在流式上是通过我前面说的设门分析的，你所说的比值是荧光显微镜中用的到的。高维的优势不用，反而退回去用低维的比值，我个人不太建议

花酱小姐

niwanmao 发表于 2024-3-3 15:20
这个图是有问题的，Q4竟然有31％的信号

JC-1的结果分析，在流式上是通过我前面说的设门分析的，你所说的 ...

JC-1的数据本来就没有固定的图，理论上Q1可以有细胞也可以没有细胞。细胞里线粒体数量多，不可能每个线粒体膜电位都一致，可能同时存在JC-1的聚合物和单体。不知道我的理解对不对