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[凋亡检测] JC-1检测结果分析

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发表于 2024-3-19 16:23:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 wangzq1000 于 2024-3-19 16:24 编辑

请教一下各位老师,JC-1试验的分群方式这样圈可以吗?
CCCP阳性对照组跟对照组相比细胞群为什么没怎么分开呢?

19-Mar-2024-Layout.jpg

原始文件.zip (3.42 MB, 下载次数: 2)

19-Mar-2024-Layout.jpg
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发表于 2024-3-19 17:18:40 | 显示全部楼层
本帖最后由 lifeng0711 于 2024-3-19 17:52 编辑

我是个流式新人,想到几个地方,抛砖引玉哈:1.  如果是贴壁细胞,培养液可能也需要离心收集离心。2. 没做去黏连,我做了一下也没啥变化。3. 这个如果用两个激光器分别激发几乎没补偿,但是如果都用488激发,在pe通道补偿还是挺大的。放一些未染色的细胞进去,看一下是不是因为补偿或者细胞有自发荧光。4.或者您的结果就是对的,药物和cccp都么有刺激细胞凋亡。
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发表于 2024-3-19 17:22:24 | 显示全部楼层
没分开可能有三种原因:
1.这个细胞系就是这个特点,膜电位下降不明显;
2.试剂盒可能有问题;
3.你做的有问题。
针对这些原因,可以进行验证:
用多聚甲醛杀死细胞,收集沉淀、计数之后和一定数量的正常培养细胞混匀,在做膜电位检测,看看是否分群,分群比例是否正确。
或者换一个品牌的试剂盒试试
或者优化染色方法,比如染色温度、时间,是否清洗等。
如果验证不方便,也可以试试将分析方法换成比较PE通道和FITC通道的平均荧光强度的比值(MFI PE/MFI FITC),比值越高说明细胞活性越高。
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