|
|
发表于 2024-4-10 10:01:21
|
显示全部楼层
要刺激外周血单个核细胞（PBMC）表达 4-1BB（又称 CD137），可以按照以下一般步骤进行：
1. 使用密度梯度离心法（如 Ficoll-Paque）从全血中分离 PBMC。PBMC 由各种免疫细胞类型组成，包括 T 细胞、B 细胞和单核细胞。
2. 使用适当的刺激激活 PBMC，例如
a. 有丝分裂原： 诱导淋巴细胞非特异性活化和增殖的物质，如植物血凝素（PHA）或ConA。
b. 抗 CD3 的抗体（抗 CD3）： 这些抗体与 T 细胞上的 CD3 受体复合物结合，提供激活信号。
c. 12 肉豆蔻酸磷脂 13-乙酸酯（PMA）和离子霉素： PMA 是一种蛋白激酶 C 激活剂，而离子霉素是一种钙离子诱导剂。它们很像 T 细胞活化所需的信号。
3. 4-1BB 的最佳表达可能需要协同刺激信号。这些信号可通过以下方式提供
a. 抗 CD28 抗体： CD28 是 T 细胞上的共刺激分子，用抗体与之结合可增强活化和 4-1BB 的表达。
b. 细胞因子： 某些细胞因子，如白细胞介素-2（IL-2）或白细胞介素-15（IL-15），可促进 4-1BB 的表达。
4. 根据刺激和所需的 4-1BB 表达水平，将活化的 PBMC 培养适当的时间，通常为 24 至 72 小时。
5. 使用流式细胞仪分析 PBMC 上 4-1BB 的表达。用荧光标记的 4-1BB 特异性抗体（抗-CD137）染色细胞，并用流式细胞仪分析染色细胞。
请注意，4-1BB 表达的最佳条件可能因具体的实验设置和所需结果而异。此外，PBMC 群体中的不同细胞类型在受到刺激后可能会表现出不同的 4-1BB 表达水平。均需要做预试验进行摸索。
PS：发帖请选择提问版块，此次先帮你转移过去：
1、基础问题（如仪器、原理、试剂耗材、软件等）
2、临床检测方面（如免疫分型、淋巴细胞亚群等）
3、科研方面（如周期、凋亡、线粒体、DC、巨噬等）
4、流式分选和磁珠分选
|
|
发表于 2024-4-9 15:40:50
