CART中Treg检测Mark选择

lijingjing

公司是制备CART的  现在想要检测CART中Treg的表型，目前是在CD3.CD4.CD25.CD127 的抗体组合和CD3.CD4.CD25.Foxp3的组合中纠结，到底哪种会更加反应真实的情况，且组合的稳定性较好？有无大佬能够解答一下疑惑，万分感谢！

niwanmao

既往的文献都证实了两者都能反映nTreg水平：Yu, N., Li, X., Song, W., Li, D., Yu, D., Zeng, X., Li, M., Leng, X., & Li, X. (2012). CD4+CD25+CD127low/− T Cells: A More Specific Treg Population in Human Peripheral Blood. Inflammation, 35, 1773 - 1780. https://doi.org/10.1007/s10753-012-9496-8.

我们既往的帖子中也可见两者比例十分接近：人外周血Treg细分亚群的设门分析和正常范围
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8902-1-1.html
(出处: 流式中文网)


不过，如果你们想做的很纯，还是建议把127、foxP3结合起来做，这样分出的Treg最纯，详见：Treg标准设门和亚群区分
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6041-1-1.html
(出处: 流式中文网)

Yuck

谢谢老师，学到了。我去好好看一看这文章

lijingjing

niwanmao 发表于 2024-4-11 19:43
既往的文献都证实了两者都能反映nTreg水平：Yu, N., Li, X., Song, W., Li, D., Yu, D., Zeng, X., Li, M., ...

谢谢老师的回复。使用CD3.CD4.CD25.CD127这个抗体组合检测外周血的Treg比例时，使用CytoFLEX 仪器检测时，图谱的分群和文献较一致，且分群很开，很容易确定圈门。但是当检测样品变成CART细胞后，再使用CD3.CD4.CD25.CD127这个组合检测，会出现有的批次的细胞分群不明显的情况。此时CD25基本上都是百分百表达啦，看CD127的分群也不是很明显。这种情况怎么好确定其正确的分群啊？（染抗体前进行了封闭处理，做了CD127的FMO）
问题1： 对于CART样品，使用CD3.CD4.CD25.CD127这个抗体组合检测Treg含量依旧适用吗？
问题2：对于CART样品，使用CD3.CD4.CD25.CD127这个抗体组合检测Treg含量若是适用，对于分群不明显的批次样品，应该如何准确的进行圈门呢？

期待老师的回复

niwanmao

lijingjing 发表于 2024-4-17 16:16
谢谢老师的回复。使用CD3.CD4.CD25.CD127这个抗体组合检测外周血的Treg比例时，使用CytoFLEX 仪器检测时， ...

可能CART细胞都活化了，不适合了

那么你只能试foxP3了

maomao

lijingjing 发表于 2024-4-17 16:16
谢谢老师的回复。使用CD3.CD4.CD25.CD127这个抗体组合检测外周血的Treg比例时，使用CytoFLEX 仪器检测时， ...

从检测的角度，肯定更倾向于CD127，要明确一点，CAR T细胞就是被活化的，所以CD25就会是100%表达，两个Panel中都有CD25的marker，这个影响是一致的。