血小板流式

我想毕业

最近一直在做血小板流式，用的抗体是CD41,CD62P,CD63，每次做都是用枸盐酸钠管抽全血，随后全血低速离心取上清，用PRP来进行后续的操作，但是经常结果图CD41的分群很不好，感觉不能很好的把血小板分开来，有时候分得开有时候又分不太开，如下图这样，想问问老师们有什么建议吗？

因为之前也用全血试验过，但是效果不如PRP，所以就一直用的PRP。

jennie1203

我用的是肝素钠抗凝管的做血小板还好啊。全血低速离心后取上清再高速离心2000rap/min 10min 取沉淀部分，PBS重悬后再孵育抗体。

我想毕业

jennie1203 发表于 2024-4-19 16:56
我用的是肝素钠抗凝管的做血小板还好啊。全血低速离心后取上清再高速离心2000rap/min 10min 取沉淀部分，PB ...

谢谢老师的建议。想问问您也是做流式吗？我PRP就只全血低速离心之后取了上清，没有再上清高速离心取沉淀了。另外想问一下老师用PBS重悬的话有特定比例吗？麻烦您了

jennie1203

PBS重悬没有特定比例，需要你自己根据实要求稀释，根据你抗体推荐的细胞密度进行稀释。你可以先少量体积重悬计个数然后再稀释。

我想毕业

jennie1203 发表于 2024-4-22 14:52
PBS重悬没有特定比例，需要你自己根据实要求稀释，根据你抗体推荐的细胞密度进行稀释。你可以先少量体积重 ...

好的，谢谢老师，我们PRP高速离心之后再做一下看看

蓝色忧郁

你这个上机模版  采用的的FSC阈值还是沿用平时骨髓/外周血的阈值吗？

我想毕业

蓝色忧郁 发表于 2024-4-23 17:15
你这个上机模版  采用的的FSC阈值还是沿用平时骨髓/外周血的阈值吗？

机器是临床老师帮忙调的，模板是用阴阳空白组加抗体和同型一起调出来的，我不太清楚这个。请问有什么不合适的地方吗？请老师批评指正一下

我想毕业

jennie1203 发表于 2024-4-19 16:56
我用的是肝素钠抗凝管的做血小板还好啊。全血低速离心后取上清再高速离心2000rap/min 10min 取沉淀部分，PB ...

另外还想问一下老师在做血小板流式的时候有出现结果不稳定的情况吗？我的结果常常一天一个样，差异很大，不知道可以怎么解决一下

蓝色忧郁

我想毕业 发表于 2024-4-24 11:53
机器是临床老师帮忙调的，模板是用阴阳空白组加抗体和同型一起调出来的，我不太清楚这个。请问有什么不合 ...

看一下你的阈值是多少？

我想毕业

蓝色忧郁 发表于 2024-4-25 14:52
看一下你的阈值是多少？

老师今天我问了一下，阈值FSC和SSC都是2000