请问组织处理跑流式为什么会有诡异的细胞群？

dou0918 · 发表于 2024-4-24 15:46:21

小鼠处死后，立马取肝脏，冷的PBS洗去血液，然后1mg/ml的胶原酶4，10ug/ml的DNase。美天旎组织解离器解离半小时，然后滤网过滤。美天旎去debris试剂盒去debris，然后裂红。上机

niwanmao · 发表于 2024-4-24 17:58:40

少量非特异性染色很正常的

dou0918 · 发表于 2024-4-24 20:12:45

niwanmao 发表于 2024-4-24 17:58
少量非特异性染色很正常的

终于等到老师回复了，谢谢老师
我的tdtomato是融合到了基因上，在细胞内就有tdtomato信号；
上图是正常的小鼠肝脏组织，按理说不应该有tdtomato信号的

wxd · 发表于 2024-4-25 09:13:16

可以排除一下死细胞试试。

dou0918 · 发表于 2024-4-25 09:30:44

wxd 发表于 2024-4-25 09:13
可以排除一下死细胞试试。

我用dapi染色，排除了死细胞，难道是快死的？哈哈哈

范晋波 · 发表于 2024-4-25 09:31:55

用一下FC受体阻断剂试试，挺好用的，黏连的图，FSC过大的也去一点就可以了

dou0918 · 发表于 2024-4-25 11:42:58

范晋波发表于 2024-4-25 09:31
用一下FC受体阻断剂试试，挺好用的，黏连的图，FSC过大的也去一点就可以了 ...

fc阻断也用了，现在怀疑是不是快死的细胞

范晋波 · 发表于 2024-4-26 09:14:44

dou0918 发表于 2024-4-25 11:42
fc阻断也用了，现在怀疑是不是快死的细胞

不，一般个头比较大的或者黏连细胞，自发荧光都很强，FSC少圈点大的，那一群就没了

dou0918 · 发表于 2024-4-26 14:28:32

范晋波发表于 2024-4-26 09:14
不，一般个头比较大的或者黏连细胞，自发荧光都很强，FSC少圈点大的，那一群就没了
...

谢谢，我试一试

dou0918 · 发表于 2024-4-27 22:30:47

范晋波发表于 2024-4-26 09:14
不，一般个头比较大的或者黏连细胞，自发荧光都很强，FSC少圈点大的，那一群就没了
...

我的细胞是组织解离出来的，细胞大小不一样，这群细胞主要集中在FSC-A 70 ,SSC-A 也在70左右。不知道是目的细胞还是粘连细胞

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