胞内因子TNF和Gzmb染不出来

shupian

需要检测3个胞内因子：IFN-g、TNF-a和Gzmb 样本是小鼠淋巴结和脾脏 细胞因子刺激用的是thermol 的细胞因子刺激+蛋白转运抑制剂（500x，00-4975-93），刺激5h 固定破膜用的是BD的51-2091KZ，45min 胞内染色 45min 做了好几次，只能染出IFN-g，另外两个染色不出来 请教各位老师，这种情况是刺激问题还是固定破膜的问题？

范晋波

我看TNFa挺好的啊

niwanmao

TNFa是不是用LPS更好？见下图：


图源：Ai W, Li H, Song N, Li L, Chen H. Optimal method to stimulate cytokine production and its use in immunotoxicity assessment. Int J Environ Res Public Health. 2013;10(9):3834-3842. Published 2013 Aug 27. doi:10.3390/ijerph10093834

shupian

niwanmao 发表于 2024-4-25 14:12
TNFa是不是用LPS更好？见下图：

明白了老师，我们改进试试
GB染色老师有经验吗，我们换了Foxp3的破膜液之后还是染不出来

shupian

范晋波 发表于 2024-4-25 09:33
我看TNFa挺好的啊

还可以，就是没有IFN的效果这么好

niwanmao

shupian 发表于 2024-4-26 09:26
明白了老师，我们改进试试
GB染色老师有经验吗，我们换了Foxp3的破膜液之后还是染不出来 ...

看这篇文献Xue J, Xu L, Zhong H, et al. Impaired regulatory function of granzyme B-producing B cells against T cell inflammatory responses in lupus mice. Lupus Sci Med. 2023;10(2):e000974. doi:10.1136/lupus-2023-000974里面的方法学，做的是小鼠脾脏B细胞颗粒酶B，但是刺激方法跟你的一样。
你要么再试几次？