实验为研究健康人外周血treg细胞,流式细胞仪为bd calibur, 四色panel(FITC,PE,PECY7,APC).现遇到奇怪的结果,已经在5个样本中出现,诚恳请教前辈们! 问题:1)图一标识1所指的群是什么细胞?这个群在isotype和染色的管子里都有出现,可见图二的单染管(图二红圈标识),这个是粒细胞吗?粒细胞不是用ficoll去掉了吗,为什么还会出现? 2)isotype边缘有一条阳性群线(图一标识2),这个是杂质还是电压设置问题?怎么能保证背景干净? 3)PE-cy7的isotype有阳性群(图一标识3),这个是非特异染色吗?我已使用全新的isoPE-cy7抗体,确保抗体没被污染,但这个群仍有出现,查阅文献抗体可能是fc段特意染色,但仍不确认,请前辈赐教!
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