求助：仪器是3激光10色的BD Canto plus，用10色方案

labdiagnosis

求助：仪器是3激光10色的BD Canto plus，用10色方案，标记分别为，FITC，PE，PerCP cy5.5,APC，APCR700，APCcy7，PEcy7,v450,v500，bv605，这10个抗体可以预混吗？预混抗体有什么要求？有什么标记的抗体是不能预混的吗？

wxd

这些荧光标记理论上不会因为预混导致结果的改变，但可能有其他因素会影响检测结果，比如抗体的稳定剂、荧光之间的补偿等。
因为不知道都有什么抗体以及抗体的种属等更详细的信息，建议你做预实验的时候提前将抗体预混看看检测结果。
另外这么多标记，建议做低表达/连续表达指标的FMO对照（根据经验，FMO对照和全染样品同时染色时，很容易加错，建议先把要加的抗体在一个离心管中先配好，之后将细胞悬浮液加到这个离心管中，而不是逐个往各个离心管中加抗体）

labdiagnosis

wxd 发表于 2024-4-26 17:21
这些荧光标记理论上不会因为预混导致结果的改变，但可能有其他因素会影响检测结果，比如抗体的稳定剂、荧光 ...

谢谢您的解答，我的抗体都是鼠抗人的，标记也是常规的TBNK，粒细胞，单核细胞的抗体，CD3，CD4，CD8，CD16，CD56，CD15，CD24，CD14，然后一个HLA-DR，38，拜托您再给看看，这些标记哪些需要做FMO吗？感觉HLA-DR应该是连续表达的，但荧光强度应该不低，除了HLA-DR以外老师您还觉得我哪个需要做？再次感谢！

niwanmao

labdiagnosis 发表于 2024-4-26 17:34
谢谢您的解答，我的抗体都是鼠抗人的，标记也是常规的TBNK，粒细胞，单核细胞的抗体，CD3，CD4，CD8，CD1 ...

大多数情况下可以预混，但是，要注意一些弱表达的标记或分群不清的标记，做好验证工作。

wxd

根据经验，CD3，CD4，CD8，CD16，CD56这些在普通科研实验中是不需要做FMO对照的，普通单染就可以了。
其他的抗体，根据我从赛默飞官网查的抗体示意图，CD14、CD24和CD38有明显分群；HLA-DR是连续表达的。这几个抗体中，CD14和CD24因为阴阳性很明显，没有特殊情况不需要做FMO对照；CD38虽然有分群，但不明显，建议做FMO对照；HLA-DR因为是连续表达，是需要做FMO对照的。

Yuck

目前就遇到一个不能预混的抗体，目前见到的这东西 能不能预混跟抗体本身及细胞有关系，比如共同交叉竞争一部分表位，或者类似的情况。

范晋波

可以预混，但是最好现配现用~