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[标本处理] 奇怪的流式图:细胞周围很多乱飞的杂点

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发表于 2024-5-18 21:03:32 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
各位老师们好!本人是一名学习免疫学的研究生,既往流式结果中偶尔会遇到杂点,但一般都不多;这是我用stem cell 分选CD4+CD25+细胞和另外一种带GFP荧光的细胞共培养,参考 文献的方法加了T activator CD3/28 beads, 收细胞时过了一遍磁力分选架,想请教各位老师们:
1.下图中突然出现很多乱飞的杂点考虑什么原因呢?个人怀疑是分选试剂中CD25-PE是阳性选择所带的颗粒可能没有去除,或者是T activator CD3/28 beads没有去干净,
2.我手动调补偿时需要考虑这些点吗?



捕获.JPG
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发表于 2024-5-19 14:15:21 | 显示全部楼层
需要看你使用了什么方案?再看FCS文件各通道之间的补偿。目前估计可能是某个通道的补偿过度
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发表于 2024-5-22 16:03:59 | 显示全部楼层
beads没去干净的话应该可以用Fsc/SSc的图看出来一些,目前这张图就感觉补偿有点过,你要不先用fsc/ssc排除一下beads选中目标细胞群
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发表于 2024-5-24 15:38:19 | 显示全部楼层
需要看一下单染补偿图
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