小鼠皮下肿瘤组织做流式

瓜瓜999

检测肿瘤内的免疫细胞，还不确实target cells是什么，所以目前myeloid cells, lymphocytes都看。分离完之后选取一定量的细胞数进行staining。

小鼠皮下肿瘤，肿瘤相对较大，但是每个样本的消化液只有5ml，因此就选取一部分肿瘤组织做流式。

在切肿瘤的过程中发现有些肿瘤血运很丰富，有些肿瘤像是脂肪组织比较多，每个肿瘤组织或多或少都不太一样。

----> 切的时候就拿不准要怎么切，不知道是否影响后续的结果？ 谢谢~

麦小光

其实不建议提前就选取切一部分，这样很容易有偏差，建议你自己用胶原酶之类的配置消化液，先进行初步消化，然后按细胞数量，等比例取部分出来继续染色

瓜瓜999

麦小光 发表于 2024-6-3 10:43
其实不建议提前就选取切一部分，这样很容易有偏差，建议你自己用胶原酶之类的配置消化液，先进行初步消化， ...

谢谢建议~
主要是因为肿瘤比较大，之前用过10ml消化液也还是不行，消化后过滤，经常很难滤下去。而且酶比较贵，一次要用很多，所以就只切了一部分。所有担心有时候因为切的位置不一样，影响后续结果。

题外问题：请问在staining之前镜下数细胞，是不是所有的活细胞都要数，不管形状/大小？（我记得所有活细胞都要数，所有再确认一下）

感谢~

麦小光

瓜瓜999 发表于 2024-6-7 02:12
谢谢建议~
主要是因为肿瘤比较大，之前用过10ml消化液也还是不行，消化后过滤，经常很难滤下去。而且酶比 ...

计量总数的时候确实是，得把除开碎片的所有细胞算进去，这样才能计算后续的某类细胞总数

麦小光

还有一个是，瘤子如果太大，要注意伦理问题，通常如果体积超过1500立方毫米，会被判定为违反伦理准则，会直接撤稿的，show 瘤子照片的时候千万注意，不过流式流式做掉的瘤子倒是没什么，毕竟看不到了

麦小光

实在消化不掉，可以先用剪刀剪碎为小块，从小块里面随机挑一部分出来继续消化，这样既不会过多损伤细胞，也不会造成后续难以消化，最后的结果也比较“均匀”，可以部分避免部分取样的时候造成的影响。

瓜瓜999

麦小光 发表于 2024-6-7 02:40
实在消化不掉，可以先用剪刀剪碎为小块，从小块里面随机挑一部分出来继续消化，这样既不会过多损伤细胞，也 ...

非常感谢~