关于扩散误差SS

Veblen

请问一下怎么去理解这种扩散误差Spillover Spreading error？ 能不能说得通俗易懂一些。

既然都可以算出来SS的值是多少，为什么还存在误差呢，一直不太明白。
希望老师能清楚易懂解释一下哈，非常感谢。

niwanmao

理解溢出扩散
溢出扩散源于检测器在光子计数过程中固有的统计变化。当测量微弱的荧光信号时，由于光子发射和检测的随机性，检测到的光子数量在不同事件之间可能有显著变化。这种变化导致阴性群体信号的扩散或宽度增加，使得从阴性群体中区分出真正的阳性事件变得更加困难。

关于溢出扩散误差的关键点如下：
1. 它是由光子计数的统计变化引起的，而不是由光谱重叠或补偿引起的。[1]
2. 随着荧光强度的增加，溢出扩散误差会增加，因为较亮的信号有更多的光子计数变化。[2]
3. 当使用具有显著光谱重叠的荧光染料组合时，这种误差更为明显，因为荧光渗漏会放大测量误差。[2]
4. 这是流式细胞术的固有局限性，无法完全消除，但可以通过仔细的组合设计和仪器优化来最小化。[1]

计算溢出扩散
虽然无法消除溢出扩散，但可以通过溢出扩散矩阵（SSM）来量化。SSM表示流式细胞仪中每对检测器之间的扩散程度。[2]
SSM是从单染色对照样品计算得出的，并提供了仪器性能和灵敏度的测量。然而，即使知道了SSM值，由于光子计数的统计性质，实际样品中仍然会存在一定程度的溢出扩散误差。


Citations:
[1] https://voices.uchicago.edu/ucflow/2020/03/04/understanding-the-trumpet-effect-how-to-design-aurora-panels-around-spreading-error/
[2] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3678531/
[3] https://wi.mit.edu/sites/default/files/2021-05/20200727_Flow_Post-it_Spreading.pdf
[4] https://www.colibri-cytometry.com/post/identifying-and-fixing-errors-in-flow-data
[5] http://web.mit.edu/flowcytometry/www/Cytometry%20tutorial%20The%20impact%20of%20adjusting%20PMT%20voltages%20on%20spillover%20and%20compensation.pdf